| 目录 | 第1-7页 |
| 英文缩写词注 | 第7-11页 |
| 摘要 | 第11-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 研究内容 | 第18-62页 |
| 第一部分 重组AMA1蛋白的制备及其诱导的小鼠抗体应答 | 第18-31页 |
| 一 材料与方法 | 第18-21页 |
| 1 疟原虫的培养和基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| 2 引物设计和PCR | 第19页 |
| 3 重组表达载体的构建和序列测定 | 第19-20页 |
| 4 质粒和菌种 | 第20页 |
| 5 重组表达产物的溶解性实验 | 第20页 |
| 6 包涵体蛋白的纯化 | 第20页 |
| 7 变性蛋白的重折叠复性 | 第20-21页 |
| 8 小鼠免疫和抗体的检测 | 第21页 |
| 9 IFA和Western blot | 第21页 |
| 10 免疫血清的体外抑制实验 | 第21页 |
| 二 结果 | 第21-29页 |
| 1 AMA1胞外域编码基因的扩增和序列分析 | 第22-24页 |
| 2 重组AMA1蛋白的表达和纯化 | 第24-27页 |
| 3 小鼠免疫血清的制备以及体外抑制实验 | 第27-29页 |
| 三 讨论 | 第29-31页 |
| 第二部分 细胞因子质粒对AMA1 DNA免疫的调节作用 | 第31-44页 |
| 一 材料与方法 | 第31-33页 |
| 1 AMA1 DNA免疫质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2 GM-CSF编码序列的测定和表达载体的构建 | 第32页 |
| 3 IL-4编码序列的测定和表达载体的构建 | 第32页 |
| 4 IL-12编码质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 5 双表达质粒pGM-CSF／pTPA-E的构建 | 第32页 |
| 6 质粒的纯化 | 第32-33页 |
| 7 AMA1 DNA免疫的抗体动力学分析 | 第33页 |
| 8 细胞因子质粒与VR1020／E的组合免疫 | 第33页 |
| 9 脾细胞增殖实验 | 第33页 |
| 二 结果 | 第33-42页 |
| 1 AMA1 DNA免疫质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2 小鼠细胞因子编码序列的测定和表达质粒的构建 | 第34-37页 |
| ·小鼠细胞因子GM-CSF的序列分析和载体构建 | 第34-35页 |
| ·小鼠细胞因子IL-4的序列测定和载体构建 | 第35-36页 |
| ·pIL-12的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·双表达质粒pGM-CSF／pTPA-E的鉴定 | 第36-37页 |
| 3 细胞因子对AMA1 DNA免疫的调节作用 | 第37-42页 |
| ·AMA1 DNA免疫的抗体动力学 | 第37页 |
| ·细胞因子表达质粒对DNA免疫应答的调节作用 | 第37-42页 |
| ·IgG抗体的水平和类型 | 第37-40页 |
| ·脾细胞的体外增殖 | 第40-42页 |
| 三 讨论 | 第42-44页 |
| 第三部分 表达AMA1的重组MVA的筛选及小鼠免疫 | 第44-54页 |
| 一 材料与方法 | 第44-47页 |
| 1 基因转移载体pⅢdHR.ssp/E的构建 | 第44-45页 |
| 2 AMA1转移载体与MVA的同源重组 | 第45页 |
| 3 重组MVA的筛选 | 第45页 |
| 4 重组MVA的鉴定 | 第45-46页 |
| 5 重组病毒的扩增和滴度测定 | 第46-47页 |
| 6 小鼠的免疫 | 第47页 |
| 二 结果 | 第47-52页 |
| 1 AMA1基因转移载体的构建 | 第47-48页 |
| 2 表达AMA1的重组MVA的筛选和鉴定 | 第48-50页 |
| ·MVA重组体的PCR鉴定 | 第48页 |
| ·AMA1在BHK21中的表达 | 第48-50页 |
| ·重组病毒rMVA/E的稳定性 | 第50页 |
| 3 重组MVA的免疫特性分析 | 第50-52页 |
| ·rMVA／E诱导小鼠抗AMA1抗体应答 | 第50页 |
| ·rMVA／E免疫小鼠的脾细胞增殖 | 第50-52页 |
| 三 讨论 | 第52-54页 |
| 第四部分 以DNA为基础的复合免疫接种诱导小鼠抗AMA1抗体应答 | 第54-62页 |
| 一 材料与方法 | 第54-55页 |
| 1 rMVA/E对DNA免疫小鼠抗体应答的增强作用 | 第54页 |
| 2 重组蛋白强化与重组MVA强化的比较以及组合强化免疫 | 第54-55页 |
| 二 结果 | 第55-60页 |
| 1 rMVA／E对DNA免疫小鼠抗体应答的增强作用 | 第55-57页 |
| 2 重组蛋白E与rMVA／E抗体强化作用的比较以及组合强化的效果 | 第57-60页 |
| 三 讨论 | 第60-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 文献回顾 | 第63-79页 |
| 一 DNA免疫的机制和优化方法 | 第63-72页 |
| 二 改良的安卡拉痘苗病毒(MVA)及其应用 | 第72-76页 |
| 三 疟原虫顶端膜抗原1(AMA1)的研究概况 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附录: 研究生期间发表的论著 | 第96页 |
