| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 一.前言 | 第12-18页 |
| 二.材料与方法 | 第18-42页 |
| (一) 材料 | 第18-20页 |
| 1.BAC克隆 | 第18页 |
| 2.菌株与质粒 | 第18-19页 |
| 3.实验用小鼠 | 第19页 |
| 4.限制性内切酶与修饰酶 | 第19页 |
| 5.其它主要试剂 | 第19页 |
| 6.放射性核素 | 第19页 |
| 7.主要仪器设备 | 第19-20页 |
| (二) 实验方法 | 第20-42页 |
| 1.含完整的人α-珠蛋白基因簇的BAC DNA的鉴定 | 第20-21页 |
| 2.利用同源重组修饰BAC DNA | 第21-28页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| ·穿梭载体的构建 | 第23-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·细胞的转化和正筛选 | 第26页 |
| ·负筛选 | 第26-27页 |
| ·Southern杂交鉴定突变体 | 第27-28页 |
| 3.显微注射用BAC DNA的制备与纯化 | 第28页 |
| 4.受精卵培养基的配制与保存 | 第28-29页 |
| 5.小鼠的选择与处理 | 第29-31页 |
| 6.超排卵和卵 | 第31页 |
| 7.显微注射 | 第31-33页 |
| 8.输卵管移卵 | 第33-35页 |
| 9.鼠尾基因组DNA的提取 | 第35页 |
| 10.PCR和Southern杂交鉴定转基因鼠 | 第35-36页 |
| 11.转基因鼠传代 | 第36页 |
| 12.胚胎小鼠器官组织的采集和保存 | 第36页 |
| 13.阳性胎鼠的PCR快速鉴定 | 第36-37页 |
| 14.组织RNA提取 | 第37页 |
| 15.RPA检测转基因小鼠中人α-珠蛋白转基因的表达 | 第37-39页 |
| 16.转基因鼠血液中人α-珠蛋白的检测 | 第39-42页 |
| 三.实验结果 | 第42-71页 |
| (一) 含人α-珠蛋白基因簇BAC克隆的进一步鉴定结果 | 第42-43页 |
| 1.BAC DNA的末端直接测序结果 | 第42页 |
| 2.BAC-FISH的检测结果 | 第42-43页 |
| (二) BAC DNA的修饰结果 | 第43-48页 |
| 1.突变盒的克隆和序列分析 | 第43-46页 |
| 2.突变BAC的正负筛选 | 第46页 |
| 3.Southern杂交检测突变体 | 第46-48页 |
| (三) 显微注射用BAC DNA的制备 | 第48-49页 |
| (四) 转基因鼠系的建立 | 第49-51页 |
| 1.转基因鼠的PCR检测 | 第49-51页 |
| (五) α-珠蛋白在转基因鼠中的表达 | 第51-71页 |
| 1.α-珠蛋白基因在正常转基因小鼠中表达的检测结果 | 第51-53页 |
| 2.转基因鼠体内人α-珠蛋白的检测 | 第53-54页 |
| 3.血红蛋白的SDS电泳 | 第54-55页 |
| 4.转基因鼠血液中表达蛋白的N-端肽序列和质谱分析 | 第55-68页 |
| 5.人α-珠蛋白基因在突变α-BAC M1转基因鼠体内的表达 | 第68-69页 |
| 6.人α-珠蛋白基因在突变α-BAC M2转基因鼠体内的表达 | 第69-71页 |
| 四.讨论 | 第71-79页 |
| (一) 人类基因组序列用于转基因动物的研究 | 第71-72页 |
| (二) 正常191K2转基因鼠的研究 | 第72-74页 |
| (三) HS-40删除后人α-珠蛋白基因在转基因鼠体内的表达 | 第74-75页 |
| (四) HS-4～HS-33间36kb删除对人α-珠蛋白基因表达的影响 | 第75-79页 |
| 五.小结 | 第79-80页 |
| 六.参考文献 | 第80-86页 |
| 七.文献综述 | 第86-92页 |
| 八.英文名词及缩写 | 第92-94页 |
| 九.致谢 | 第94-95页 |
| 十.个人简历 | 第95页 |
