| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| CONTENTS | 第12-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-26页 |
| ·血栓栓塞性疾病的现状 | 第15页 |
| ·血栓的形成 | 第15-18页 |
| ·机体凝血系统与抗凝血系统 | 第15-16页 |
| ·血栓的形成 | 第16-18页 |
| ·抗血栓药物 | 第18-22页 |
| ·纤溶酶原激活剂 | 第18-22页 |
| ·胰蛋白酶 | 第22-23页 |
| ·胰蛋白酶分布 | 第22页 |
| ·丝氨酸胰蛋白酶样酶的组成与特性 | 第22-23页 |
| ·黄粉虫虫抗血栓的实验研究进展 | 第23页 |
| ·本课题研究内容及意义 | 第23-26页 |
| ·研究意义 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 不同提取方法提取黄粉虫总RNA | 第26-31页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-29页 |
| ·黄粉虫预处理 | 第28页 |
| ·黄粉虫总RNA的不同提取方法 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第29页 |
| ·紫外分光光度计检测 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第29-30页 |
| ·紫外分光光度计检测 | 第30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶cDNA全长克隆 | 第31-49页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·试剂以及试剂盒 | 第31页 |
| ·主要仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·cDNA第一链 | 第32页 |
| ·温度梯度简并PCR获得丝氨酸胰蛋白酶样酶保守序列 | 第32-33页 |
| ·cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA end,RACE) | 第33-35页 |
| ·黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶(TMTLSP)全基因克隆 | 第35-37页 |
| ·序列分析 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-47页 |
| ·TMTLSP基因保守片段克隆及测序 | 第38-39页 |
| ·3’RACE产物克隆以及测序 | 第39-40页 |
| ·5’RACE产物克隆以及测序 | 第40-41页 |
| ·黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶(TMTLSP)全基因克隆及碱基序列初步分析#27 | 第41-43页 |
| ·感受态制备检测结果 | 第43页 |
| ·TMTLSP全基因克隆鉴定 | 第43-44页 |
| ·序列分析 | 第44-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| ·黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶cDNA全长克隆 | 第47页 |
| ·TMTLSP基因碱基分析及编码氨基酸分析 | 第47-49页 |
| 第四章 黄粉虫丝氨酸胰蛋白酶样酶TMTLSP原核表达 | 第49-61页 |
| ·材料 | 第49-53页 |
| ·材料、菌株以及表达载体 | 第49-50页 |
| ·试剂配方 | 第50-52页 |
| ·主要仪器 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·TMTLSP基因片段的制备 | 第53-54页 |
| ·表达载体的制备 | 第54页 |
| ·表达载体的构建及筛选 | 第54页 |
| ·表达菌株大肠杆菌BL21感受态制备及转化检验 | 第54页 |
| ·表达菌株的制备及鉴定 | 第54-55页 |
| ·目标蛋白诱导表达 | 第55页 |
| ·表达蛋白鉴定 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-60页 |
| ·双酶切表达载体制备 | 第56页 |
| ·大肠杆菌DH5α转化保存表达载体及克隆鉴定 | 第56-58页 |
| ·目标蛋白诱导表达 | 第58-60页 |
| ·本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 包涵体纯化与复性、目标蛋白的活性检验 | 第61-68页 |
| ·材料 | 第61-63页 |
| ·主要试剂及配方 | 第61-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-64页 |
| ·包涵体粗提及变性 | 第63页 |
| ·Ni柱纯化目标蛋白 | 第63-64页 |
| ·目标蛋白复性 | 第64页 |
| ·纤溶平板测定酶活力 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-66页 |
| ·SDS-PAGE分析包涵体纯化结果 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE分析Ni柱纯化结果 | 第65-66页 |
| ·纤溶平板测定酶活力 | 第66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 讨论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
