| 英文缩写词 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 文献回顾1 | 第15-34页 |
| 丙型肝炎病毒的分子生物学和抗病毒基因治疗 | 第15-34页 |
| 1.HCV的生物学特征 | 第15-18页 |
| 2 HCV基因组RNA的结构和功能 | 第18-23页 |
| 3 HCV基因组的变异与基因分型 | 第23-24页 |
| 4 抗HCV基因治疗的研究概况 | 第24-28页 |
| 参考文献 | 第28-34页 |
| 文献回顾2 | 第34-50页 |
| 抗病毒核酶的研究进展 | 第34-50页 |
| 1 Rz的结构类型及其活性检测 | 第34-36页 |
| 2 抗病毒Rz切割位点的选择和设计 | 第36-37页 |
| 3 Rz的靶细胞导入和细胞内共域化 | 第37-40页 |
| 4 提高Rz稳定性和切割效率的方法 | 第40-42页 |
| 5 抗病毒Rz的应用 | 第42-44页 |
| 6 存在的问题及展望 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 文献回顾3 | 第50-62页 |
| 丙型肝炎病毒细胞培养和动物模型的研究现状及其应用 | 第50-62页 |
| 1 HCV基因片段的实验模型 | 第50-51页 |
| 2 HCV全基因序列感染／转染的细胞模型 | 第51-56页 |
| 3 小动物感染模型 | 第56-58页 |
| 4 存在的问题和展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 第一部分 抗丙型肝炎病毒锤头结构核酶的设计、载体的构建和体外切割 | 第62-82页 |
| 1 材料 | 第62-65页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·宿主菌及质粒 | 第62-65页 |
| 2 方法 | 第65-72页 |
| ·感受态的制备与转化 | 第65页 |
| ·质粒DNA的制备与纯化 | 第65-66页 |
| ·Rz的计算机辅助设计 | 第66-67页 |
| ·Rz基因的合成与纯化 | 第67页 |
| ·Rz转录载体的构建(pGEM-Rz) | 第67-69页 |
| ·自剪切Rz载体的构建(pGENE-Rz) | 第69页 |
| ·Rz真核表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·Rz对靶基因RNA的体外切割 | 第70-72页 |
| 3 结果 | 第72-81页 |
| ·惠赠质粒载体的酶切鉴定 | 第72-73页 |
| ·计算机辅助设计的Rz和理论参数 | 第73-75页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第75-78页 |
| ·pGEM-Rz在体外对靶基因的切割作用 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 第二部分抗丙型肝炎病毒5,非编码区核酶在细胞内对HCV翻译启动的抑制作用 | 第82-95页 |
| 1 材料 | 第82页 |
| ·细胞株 | 第82页 |
| ·培养基和新生小牛血清 | 第82页 |
| ·同位素 | 第82页 |
| ·其它 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-85页 |
| ·HHCC细胞的培养 | 第82页 |
| ·质粒DNA的细胞转染 | 第82-83页 |
| ·细胞的收集与提取液的制备 | 第83页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第83页 |
| ·合成Rz单链探针的标记 | 第83-84页 |
| ·pcEM-Rz RNA的打点杂交 | 第84页 |
| ·pCMVNCR转染细胞RNA的PCR检测 | 第84页 |
| ·荧光素酶(luc)的活性检测 | 第84页 |
| ·G418对转染细胞克隆的筛选 | 第84-85页 |
| ·细胞生长特性的观察和细胞周期的检测 | 第85页 |
| ·统计学分析 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-92页 |
| ·pcEM-Rz(RNA)在HHCC细胞内的表达 | 第85-86页 |
| ·luc基因在HHCC细胞中的表达 | 第86-87页 |
| ·pcEM-Rz213与pCMVNCRluc共转染对luc活性的抑制作用 | 第87-88页 |
| ·G_(418)筛选对Rz与luc基因共转染的影响 | 第88页 |
| ·pcEM-Rz213与pcENE-Rz213对luc活性作用的比较 | 第88-89页 |
| ·pcEM-Rz213的“细胞内免疫” | 第89-90页 |
| ·Rz213与Rz260对细胞luc活性表达的比较 | 第90-92页 |
| ·Rz转染对细胞增殖和生长特性的影响 | 第92页 |
| 4 讨论 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-95页 |
| 第三部分丙型肝炎病毒与荧光素酶融合基因可调控细胞模型的初步建立 | 第95-103页 |
| 1 材料与方法 | 第95-98页 |
| ·主要试剂 | 第95页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第95页 |
| ·载体的构建 | 第95-97页 |
| ·细胞培养与DNA转染 | 第97页 |
| ·克隆筛选 | 第97页 |
| ·细胞爬片的免疫组化染色 | 第97页 |
| ·细胞裂解物的制备和质粒转染细胞luc活性的检测 | 第97-98页 |
| 2 结果 | 第98-102页 |
| ·构建载体的酶切鉴定 | 第98-99页 |
| ·细胞爬片中HCV C抗原的表达 | 第99页 |
| ·转染细胞中luc基因的表达 | 第99页 |
| ·四环素对pBPST-HCV-luc载体luc活性表达的影响 | 第99-100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-103页 |
| 小结 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 附1.在读期间发表的论文目录 | 第105-106页 |
| 附2.作者简介 | 第106-107页 |
| 附3.哲学论文 | 第107-112页 |
