| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-24页 |
| ·双组分系统 | 第10-15页 |
| ·双组分系统的基本特征 | 第10-12页 |
| ·双组分系统磷酸化传递过程 | 第12-13页 |
| ·双组分系统的多样性 | 第13-15页 |
| ·新型报告基因GFP | 第15-18页 |
| ·GFP的生化性质 | 第15-16页 |
| ·GFP基因的改进 | 第16-17页 |
| ·GFP的应用前景 | 第17-18页 |
| ·作为报告基因构建基因工程载体 | 第17页 |
| ·目的基因的功能研究 | 第17页 |
| ·蛋白质缔合作用研究 | 第17页 |
| ·病原体与宿主关系的研究 | 第17-18页 |
| ·GFP在生态学中的应用 | 第18页 |
| ·GFP在生物防治中的应用 | 第18页 |
| ·GFP作为一种新型免疫标记物的探索 | 第18页 |
| ·用于研究蛋白质-DNA相互作用的方法 | 第18-21页 |
| ·酵母单杂交系统 | 第18-19页 |
| ·细菌单杂交系统 | 第19页 |
| ·SELEX技术 | 第19-20页 |
| ·基因芯片技术 | 第20页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第20页 |
| ·足迹实验 | 第20-21页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第21页 |
| ·染色质免疫沉淀技术 | 第21页 |
| ·双组分系统COLR-COLS研究现状 | 第21-22页 |
| ·本课题目的及意义 | 第22-24页 |
| ·研究意义及基本设想 | 第22-23页 |
| ·主要技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-34页 |
| ·实验材料 | 第24-30页 |
| ·菌株 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·抗生素 | 第25-26页 |
| ·质粒 | 第26-27页 |
| ·PCR反应的引物 | 第27页 |
| ·试剂和仪器 | 第27-30页 |
| ·RNA提取、纯化以及RT-PCR所用到的试剂 | 第27-28页 |
| ·质粒和总DNA提取、质粒转化时所用到的试剂 | 第28页 |
| ·RNA提取纯化所要做的准备 | 第28页 |
| ·反转录(RT)所要做的准备 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE电泳所需试剂 | 第29页 |
| ·GFP荧光强度检测所需试剂 | 第29页 |
| ·RNA提取纯化以及RT所需的试剂 | 第29页 |
| ·酶切、酶连、PCR和DNA回收所需试剂 | 第29页 |
| ·仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·大肠杆菌和恶臭假单胞菌质粒DNA的提取 | 第30页 |
| ·恶臭假单胞菌总DNA的提取 | 第30页 |
| ·DNA电泳分析 | 第30页 |
| ·DNA片段的回收 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30页 |
| ·RNA提取 | 第30-31页 |
| ·RNA纯化及检测 | 第31页 |
| ·反转录(RT) | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第32页 |
| ·恶臭假单胞菌的电转化 | 第32页 |
| ·绿色荧光蛋白(GFP)荧光强度的检测 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第32-34页 |
| ·蛋白的诱导、表达和检测 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE凝胶的制备 | 第33页 |
| ·电泳、染色及脱色 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-49页 |
| ·RT-PCR分析 | 第34-38页 |
| ·确定恶臭假单胞菌CD2中受ColR-ColS调控的基因或基因簇 | 第34-35页 |
| ·用于RT-PCR的特异性引物的设计以及验证 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR | 第36-38页 |
| ·RNA提取纯化并初步定量 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR结果 | 第37-38页 |
| ·小结与讨论 | 第38页 |
| ·启动子在恶臭假单胞菌不同菌株内的表达量分析 | 第38-44页 |
| ·重组质粒pEGP、pECGP、pEOGP的构建 | 第39-41页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌及恶臭假单胞菌中的表达 | 第41-42页 |
| ·检测菌悬液荧光强度确定启动子表达量 | 第42-44页 |
| ·小结与讨论 | 第44页 |
| ·COLR-COLS双组分系统体外表达 | 第44-49页 |
| ·重组质粒p6PR的构建 | 第45-46页 |
| ·体外检测ColR蛋白的表达 | 第46页 |
| ·共转化质粒pETR和pOKDS的构建 | 第46-48页 |
| ·小结与讨论 | 第48-49页 |
| 总结和展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 附录 质粒构建流程图 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63页 |