| 摘要 | 第1-11页 |
| 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 猪圆环病毒研究进展 | 第11-21页 |
| ·病原学 | 第11-16页 |
| ·病毒的发现 | 第11-12页 |
| ·理化特性 | 第12页 |
| ·病毒的培养特性 | 第12页 |
| ·复制动力学 | 第12-13页 |
| ·病毒基因组 | 第13页 |
| ·复制与转录 | 第13-14页 |
| ·主要结构蛋白 | 第14-15页 |
| ·PCV2 疫苗的研究现状 | 第15-16页 |
| ·流行病学 | 第16-19页 |
| ·流行情况 | 第16-17页 |
| ·致病机理 | 第17-18页 |
| ·病理变化 | 第18-19页 |
| ·诊断与防制 | 第19-21页 |
| ·诊断 | 第19页 |
| ·防制 | 第19-21页 |
| 2 白介素-2 研究进展 | 第21-25页 |
| ·白介素-2 的发现与命名 | 第21页 |
| ·IL-2 受体(IL-2R)的结构及特性 | 第21-22页 |
| ·IL-2 的种属特异性 | 第22页 |
| ·IL-2 的生物学活性 | 第22-23页 |
| ·刺激T 细胞生长 | 第22-23页 |
| ·诱导细胞毒作用 | 第23页 |
| ·对 B 细胞的作用 | 第23页 |
| ·对巨噬细胞的作用 | 第23页 |
| ·IL-2 的应用 | 第23-25页 |
| ·免疫治疗剂 | 第23页 |
| ·作为免疫增强剂 | 第23-24页 |
| ·构建新型基因工程疫苗 | 第24-25页 |
| 引言 | 第25-26页 |
| 试验一 PCV2-LINKER-POIL-2 嵌合基因及其真核表达载体的构建 | 第26-36页 |
| 1 材料与方法 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·细胞株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第26页 |
| ·主要溶液的配制 | 第26-27页 |
| ·质粒 DNA 提取用溶液 | 第26页 |
| ·大肠杆菌培养用溶液 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖电泳凝胶用溶液 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-32页 |
| ·单表达 Cap 蛋白pcDNA3.1/ORF2 重组表达质粒的构建 | 第27-30页 |
| ·PCV2 ORF2 基因的扩增 | 第27页 |
| ·PCV2 ORF 基因的回收 | 第27-28页 |
| ·PCV2 ORF2 基因与pGEM-T Easy Vector 的连接 | 第28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28页 |
| ·挑斑 | 第28-29页 |
| ·重组质粒 DNA 的小量制备—碱裂解法 | 第29页 |
| ·克隆质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·单表质粒pcDNA3.1/ORF2 的构建 | 第29-30页 |
| ·共表达 Cap 蛋白和 PoIL-2 蛋白嵌合基因 PCV2-linker-PoIL-2 的构建 | 第30-32页 |
| ·PCV2 ORF2 和 POIL-2 基因的扩增 | 第30页 |
| ·PCV2 ORF2 基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·POIL-2 基因的扩增 | 第31页 |
| ·通过 SOE-PCR 构建 PCV2-linker-PoIL-2 嵌合基因 | 第31页 |
| ·克隆质粒pT/PCV2-linker-PoIL-2 的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·共表达重组质粒 pcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)的构建 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·单表达 CAP 蛋白 PCDNA3.1/ORF2 重组表达质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·通过 SOE-PCR 构建 PCV2-LINKER-POIL2 嵌合基因的鉴定 | 第33页 |
| ·PCDNA3.1/PCV2-LINKER-POIL2 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 3 讨论与结论 | 第34-36页 |
| 试验二 RPCDNA3.1/PCV2-LINKER-POIL-2 质粒在 COS-7 细胞中的表达及鉴定 | 第36-42页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·细胞株和质粒 | 第36页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第36页 |
| ·主要溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·细胞培养用溶液 | 第36页 |
| ·大肠杆菌培养用溶液 | 第36-37页 |
| ·琼脂糖电泳凝胶用溶液 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·无内毒素重组质粒pcDNA3.1/ORF2、pcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2 及空质粒 pcDNA3.1（＋）的提取 | 第37-38页 |
| ·重组质粒瞬时转染 COS-7 细胞 | 第38-39页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第39-40页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）检测重组质粒表达的 Cap 蛋白 | 第39页 |
| ·ELISA 方法检测rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2 表达的 PoIL-2 蛋白 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-41页 |
| ·去内毒素重组质粒浓度 | 第40页 |
| ·间接免疫荧光（IFA）方法检测 COS-7 细胞中表达的重组融合蛋白中 CAP 蛋白活性 | 第40页 |
| ·间接 ELISA 检测 COS-7 细胞中表达的重组融合蛋白中 POIL-2 蛋白活性 | 第40-41页 |
| 3 讨论与结论 | 第41-42页 |
| 试验三 RPCDNA3.1/PCV2-LINKER-POIL2 质粒在小鼠和猪体内的免疫效果研究 | 第42-50页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·试验动物 | 第42页 |
| ·质粒和细菌 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·大量提取质粒及纯化所需溶液 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·重组质粒的大量提取及纯化 | 第43-44页 |
| ·rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2 质粒免疫小鼠试验 | 第44页 |
| ·rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2 质粒免疫猪试验 | 第44-45页 |
| ·ELISA 检测 Balb/c 小鼠和猪血清中 PCV2 抗体水平 | 第45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-48页 |
| ·两个重组质粒及空质粒的浓度 | 第45-46页 |
| ·PCR 和双酶切鉴定大量提重组质粒 | 第46页 |
| ·ELISA 检测 BALB/C小鼠血清中 PCV2 抗体 | 第46-47页 |
| ·ELISA 检测猪血清中 PCV2 抗体 | 第47-48页 |
| 3 讨论与结论 | 第48-50页 |
| 创新点 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| ABSTRACT | 第61-62页 |
