| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-39页 |
| 一、细胞凋亡研究进展 | 第12-21页 |
| 1 细胞凋亡 | 第12-15页 |
| ·细胞凋亡的概念 | 第12-13页 |
| ·细胞凋亡与细胞坏死 | 第13-14页 |
| ·线虫中的细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 2 凋亡细胞吞噬信号通路 | 第15-18页 |
| 3 吞噬细胞第二条信号通路中相关蛋白研究现状 | 第18-19页 |
| 4 凋亡细胞吞噬信号通路中相关蛋白的结构研究现状 | 第19-20页 |
| 5 本文的研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 二、结构生物学实验原理和研究方法 | 第21-39页 |
| 1 信息检索与生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2 分子克隆实验技术和方法 | 第22-39页 |
| ·目的基因片段的获得 | 第22-24页 |
| ·酶切、连接、转化及融合蛋白的表达 | 第24-25页 |
| ·蛋白表达体系 | 第25-27页 |
| ·蛋白质纯化方法 | 第27-28页 |
| ·蛋白质的结晶 | 第28-32页 |
| ·晶体的X-射线衍射与结构解析 | 第32-39页 |
| 研究报告 | 第39-77页 |
| 第一章 CED-2,CED-5载体构建及融合蛋白的表达纯化 | 第39-68页 |
| 实验1 CED-2全长表达与纯化 | 第40-48页 |
| 1 实验材料 | 第40-41页 |
| ·质粒、菌种 | 第40页 |
| ·试剂及配方 | 第40-41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| ·重组质粒pET28a-CED-2的构建 | 第41-43页 |
| ·CED-2融合蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·CED-2融合蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·CED一2融合蛋白亲和柱初步纯化 | 第44页 |
| ·蛋白质凝胶过滤纯化 | 第44页 |
| 3 结果与讨论 | 第44-48页 |
| ·重组质粒pET28a-CED-2的构建 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第45-48页 |
| 实验2 CED-2(1-174)表达纯化 | 第48-52页 |
| 1 材料与方法 | 第48-49页 |
| ·载体构建主要过程 | 第48页 |
| ·CED-2(1-174)表达纯化 | 第48-49页 |
| 2 结果与讨论 | 第49-52页 |
| 实验3 CED-5片段的表达纯化 | 第52-57页 |
| 1 材料和方法 | 第54-57页 |
| ·CED-5(1715-1781)克隆载体构建主要过程 | 第54页 |
| ·CED-5(1715-1781)-pET21b的表达纯化 | 第54-57页 |
| 实验4 CED-2、CED-5片段的共表达及共纯化 | 第57-61页 |
| 1 材料和方法 | 第57-58页 |
| ·pET28a-CED2与pGEX6p-CED5(1715-1781)的共表达 | 第57页 |
| ·SuperdexG-200分子筛凝胶过滤层析 | 第57-58页 |
| 2 结果与讨论 | 第58-61页 |
| 实验5 CED-2、CED-5片段的体外Pull-down | 第61-64页 |
| 1 材料和方法 | 第61-63页 |
| ·CED-5(1759-1775)-pGEX6P和CED-5(1716-1735)-pGEX-6P克隆载体构建 | 第61-62页 |
| ·CED-5(1759-1775)-pGEX-6P和CED-5(1716-1735)-pGEX-6P表达 | 第62-63页 |
| 2 结果与讨论 | 第63-64页 |
| 实验6 CED-2(1-174)和CED-5(1715-1781)混合纯化 | 第64-67页 |
| 1 材料和方法 | 第64页 |
| ·CED-2(1-174)纯化 | 第64页 |
| ·CED-5(1715-1781)纯化 | 第64页 |
| ·CED-2(1-174)和CED-5(1715-1781)混合后凝胶过滤 | 第64页 |
| 2 结果与讨论 | 第64-67页 |
| 本章小结 | 第67-68页 |
| 第二章 蛋白晶体的筛选与优化 | 第68-77页 |
| 实验1 晶体的筛选 | 第69-72页 |
| 1 材料和方法 | 第69-70页 |
| ·CED-2(1-174)蛋白晶体生长条件的筛选 | 第69-70页 |
| ·CED-2全长蛋白晶体生长条件的筛选 | 第70页 |
| 2 实验结果 | 第70-72页 |
| ·CED-2(1-174)蛋白用气体悬滴法筛选晶体生长条件 | 第70-71页 |
| ·CED-2全长用气体悬滴法筛选晶体生长条件 | 第71-72页 |
| 实验2 晶体的优化 | 第72-76页 |
| 1 材料和方法 | 第72-73页 |
| ·pH梯度优化 | 第72页 |
| ·沉淀剂种类与浓度梯度优化 | 第72-73页 |
| 2 优化结果 | 第73-76页 |
| 本章小结与讨论 | 第76-77页 |
| 实验主要结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
