| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-22页 |
| ·抗菌肽概述 | 第11-14页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·抗菌肽结构 | 第11-12页 |
| ·抗菌肽的生物活性 | 第12页 |
| ·抗菌肽的作用方式 | 第12-13页 |
| ·抗菌肽的作用选择性及其影响因素 | 第13-14页 |
| ·细菌对抗菌肽的抵抗 | 第14页 |
| ·家蚕抗菌肽moricin | 第14-18页 |
| ·引言 | 第14-15页 |
| ·家蚕抗菌肽分子生物学 | 第15页 |
| ·家蚕抗菌肽moricin的研究进展 | 第15-16页 |
| ·家蚕抗菌肽moricin的分子结构 | 第16页 |
| ·家蚕抗菌肽moricin的表达调控 | 第16-18页 |
| ·重组moricin表达体系的选择 | 第18-20页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·大肠杆菌表达体系 | 第18-19页 |
| ·酵母表达体系 | 第19页 |
| ·转基因 | 第19页 |
| ·其它 | 第19-20页 |
| ·包涵体复性 | 第20-21页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·包涵体的提取 | 第20页 |
| ·包涵体的溶解 | 第20页 |
| ·包涵体的复性 | 第20-21页 |
| ·本论文的选题依据与研究内容 | 第21-22页 |
| 2 柞蚕moricin-2目的基因的克隆 | 第22-36页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验仪器及用具 | 第22-23页 |
| ·主要实验材料 | 第23页 |
| ·主要溶液配制 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·柞蚕脂肪体总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·柞蚕moricin-2基因全序列的克隆 | 第24-30页 |
| ·柞蚕抗菌肽moricin基因片段的克隆 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 3 柞蚕moricin-2氨基酸序列的生物信息学分析 | 第36-42页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·应用软件及网络资源 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·同源性比对 | 第36页 |
| ·氨基酸组成 | 第36页 |
| ·蛋白质性质分析 | 第36页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第36页 |
| ·信号肽预测 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·同源性比对分析结果 | 第37页 |
| ·编码氨基酸序列 | 第37-38页 |
| ·蛋白质性质分析 | 第38页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第38-39页 |
| ·信号肽预测结果 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 4 柞蚕抗菌肽moricin-2基因原核表达 | 第42-55页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验仪器及用具 | 第42页 |
| ·主要实验材料 | 第42-43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43页 |
| ·柞蚕抗菌肽moricin-2基因原核表达载体的构建 | 第43-46页 |
| ·构建路线 | 第43-44页 |
| ·引物的设计与合成 | 第44页 |
| ·pET28a(+)质粒小提 | 第44-45页 |
| ·连接 | 第45-46页 |
| ·重组质粒提取 | 第46页 |
| ·重组质粒的双酶切验证 | 第46页 |
| ·测序验证 | 第46页 |
| ·柞蚕抗菌肽重组基因pET28a(+)-moricin-2的表达 | 第46-50页 |
| ·重组基因pET28a(+)-moricin-2在大肠杆菌中的表达 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白质 | 第47-49页 |
| ·表达条件优化 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-moricin-2双酶切验证及测序 | 第50-51页 |
| ·重组表达蛋白pET28a(+)-moricin-2的SDS-PAGE鉴定 | 第51-52页 |
| ·优化IPTG浓度的SDS-PAGE鉴定 | 第52页 |
| ·优化IPTG浓度表达蛋白的可溶性SDS-PAGE鉴定 | 第52页 |
| ·优化诱导温度表达蛋白OD600值检测 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 5 重组蛋白pET28a(+)-moricin-2的分离纯化 | 第55-60页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·实验仪器及用具 | 第55页 |
| ·主要实验材料 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-58页 |
| ·溶液配制 | 第56页 |
| ·重组蛋白复性 | 第56-57页 |
| ·复性蛋白检测 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58页 |
| ·复性蛋白SDS-PAGE检测 | 第58页 |
| ·复性蛋白含量检测 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 结论与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录A 缩略语表及名称说明 | 第64-65页 |
| 附录B-Ⅰ pET28a(+)载体质粒 | 第65-66页 |
| 附录B-Ⅱ PCR2.1载体质粒 | 第66-67页 |
| 附录C pET28a(+)-moricin-2的测序图 | 第67-69页 |
| 附录D 同源序列比对结果 | 第69-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
