| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 第一篇 分文献综述 | 第12-37页 |
| 第一章 瘦素的研究进展 | 第12-26页 |
| 1 瘦素的发现 | 第12-13页 |
| 2 瘦素基因 | 第13页 |
| 3 瘦素的结构与分布 | 第13-15页 |
| ·瘦素的一级结构 | 第13页 |
| ·瘦素的二级结构 | 第13-14页 |
| ·瘦素的三级结构 | 第14页 |
| ·瘦素的分布及影响 | 第14-15页 |
| 4 瘦素受体 | 第15-16页 |
| ·瘦素受体基因 | 第15页 |
| ·瘦素受体结构及分布 | 第15-16页 |
| 5 瘦素的生物学功能 | 第16-18页 |
| ·瘦素对脂肪组织的作用 | 第16页 |
| ·瘦素对葡萄糖代谢的作用 | 第16-17页 |
| ·瘦素对胰岛及胰岛素的作用 | 第17-18页 |
| ·瘦素与生殖 | 第18页 |
| ·瘦素与免疫 | 第18页 |
| ·瘦素与免疫细胞的增殖 | 第18页 |
| 6 瘦素的作用机制 | 第18-20页 |
| ·瘦素调节脂肪和能量代谢的机制 | 第18-19页 |
| ·瘦素通过中枢神经系统以及外周发挥作用 | 第19-20页 |
| ·瘦素的信号转导 | 第20页 |
| 7 基因工程修饰动物与瘦素 | 第20-21页 |
| 8 瘦素在临床研究中的应用 | 第21-23页 |
| ·瘦素的预警作用 | 第21-22页 |
| ·用重组瘦素进行肥胖治疗 | 第22页 |
| ·用重组人瘦素治疗糖尿病患者 | 第22-23页 |
| 9 瘦素研究展望 | 第23页 |
| 参考文献 | 第23-26页 |
| 第二章 输卵管生物反应器的研究进展 | 第26-37页 |
| 1 输卵管生物反应器的基本原理及载体构建 | 第26-29页 |
| ·鸡卵清蛋白 | 第26-28页 |
| ·卵清蛋白基因结构 | 第26页 |
| ·卵清蛋白基因的表达调控 | 第26-28页 |
| ·输卵管特异表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2 鸡输卵管上皮细胞及输卵管的暂态表达研究 | 第29-30页 |
| ·鸡输卵管上皮细胞表达法 | 第29页 |
| ·输卵管暂态表达法 | 第29-30页 |
| 3 转基因鸡研究进展 | 第30-32页 |
| 参考文献 | 第32-37页 |
| 第二篇 试验研究 | 第37-56页 |
| 实验一 人瘦素基因全长cDNA 序列的克隆及序列分析 | 第37-46页 |
| 1 材料和方法 | 第37-41页 |
| ·菌种及试剂 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·RNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第38页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第38页 |
| ·PCR 扩增OB 基因 | 第38页 |
| ·OB 基因的克隆 | 第38-40页 |
| ·产物的纯化回收 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第39页 |
| ·OB 基因与T 载体的连接 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的提取 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·重组质粒的诱导表达和蛋白检测 | 第40-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·人脂肪组织总RNA 的提取 | 第41页 |
| ·人瘦素基因cDNA 的扩增 | 第41-42页 |
| ·人瘦素编码基因cDNA 的T-A 克隆 | 第42页 |
| ·人瘦素基因的测序 | 第42页 |
| ·重组原核表达载体的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pGEX-OB 诱导表达 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4. 结论 | 第44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 实验二 人瘦素蛋白原核表达的研究 | 第46-52页 |
| 1 材料和方法 | 第46-47页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第47页 |
| ·电穿孔法转染3T3 细胞 | 第47页 |
| ·重组人素蛋白的生物学活性鉴定 | 第47页 |
| 2. 结果 | 第47-49页 |
| ·真核表达载体的鉴定 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR 检测OB 表达 | 第48页 |
| ·重组人素蛋白的生物学活性鉴定 | 第48-49页 |
| 3. 讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 实验三 鸡输卵管暂态表达人瘦素蛋白的研究 | 第52-56页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| ·质粒和试剂 | 第52页 |
| ·实验动物 | 第52页 |
| ·表达瘦素的重组载体的构建 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的制备 | 第53页 |
| ·产蛋鸡的选择及重组载体的注射 | 第53页 |
| ·重组人瘦素蛋白的检测 | 第53-54页 |
| 2 结果 | 第54-55页 |
| ·转染剂质粒DNA 的混合比例 | 第54页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第54页 |
| ·Westblot 检测人瘦素蛋白 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56页 |
| 全文结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第58页 |