| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 本论文的研究背景和立题依据 | 第8页 |
| 本论文的研究内容和意义 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-17页 |
| 一、蛋白质的结构 | 第9-12页 |
| (一) 蛋白质的一级结构 | 第9页 |
| (二) 蛋白质的二级结构 | 第9-12页 |
| (三) 蛋白质的三级结构 | 第12页 |
| (四) 蛋白质的四级结构 | 第12页 |
| 二、蛋白质晶体学 | 第12-14页 |
| (一) 蛋白质晶体学的发展 | 第12-13页 |
| (二) 蛋白质结晶原理 | 第13页 |
| (三) 蛋白质晶体学特点 | 第13-14页 |
| (四) 蛋白质晶体学发展及应用 | 第14页 |
| 三、结构基因组学 | 第14-17页 |
| (一) 高效率的结构基因组学 | 第14-15页 |
| (二) Gateway~(TM)基因克隆技术 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-26页 |
| 一、实验材料 | 第17页 |
| (一) 菌株及其培养试剂 | 第17页 |
| (二) 原始质粒 | 第17页 |
| (三) 主要试剂及试剂盒 | 第17页 |
| (四) 实验设备及仪器 | 第17页 |
| 二、实验方法 | 第17-26页 |
| (一) 目标基因的选择 | 第17-18页 |
| (二) Gateway~(TM)构建表达载体 | 第18-20页 |
| (三) PCR 检测表达载体 | 第20-21页 |
| (四) 重组质粒的表达及检测 | 第21-22页 |
| (五) 表达产物的可溶性鉴定 | 第22页 |
| (六) 蛋白质纯化方法 | 第22-24页 |
| (七) Bradford 法测定蛋白浓度 | 第24页 |
| (八) 坐滴法蛋白质晶体生长条件筛选 | 第24-25页 |
| (九) 悬滴法优化蛋白质晶体 | 第25页 |
| (十) 衍射数据的收集和处理 | 第25页 |
| (十一) 生物信息学检索及分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与分析 | 第26-37页 |
| 一、目标基因选择 | 第26-30页 |
| 二、GATEWAY~(TM)构建表达载体PCR 检测 | 第30页 |
| 三、目的基因的表达检测 | 第30-33页 |
| (一) BL21(DE3)表达目的基因 | 第30-32页 |
| (二) E.Coli Rosetta（DE3）表达目的基因 | 第32-33页 |
| 四、目的蛋白的可溶性检测 | 第33页 |
| 五、蛋白质的纯化 | 第33-36页 |
| (一) Ni 亲和层析筛选可纯化蛋白 | 第34-35页 |
| (二) Superdex75 凝胶过滤进一步纯化蛋白 | 第35-36页 |
| 六、蛋白质晶体生长条件的筛选及优化 | 第36-37页 |
| (一) 蛋白质晶体生长条件的筛选 | 第36页 |
| (二) 蛋白质晶体生长条件的优化 | 第36-37页 |
| 第四章 讨论 | 第37-42页 |
| 一、GATEWAY~(TM)技术克隆目的基因 | 第37页 |
| 二、蛋白质表达检测及可溶性分析 | 第37-39页 |
| (一) 目的基因的表达及可溶性分析 | 第37-38页 |
| (二) 表达蛋白质氨基酸组成与表达能力，可溶性之间关系 | 第38-39页 |
| 三、蛋白质的纯化策略 | 第39-40页 |
| 四、晶体初筛，优化及X 射线初级衍射 | 第40页 |
| 五、高通量结构基因组学筛选 | 第40-42页 |
| 第五章 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第47页 |
