中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-21页 |
缩略词 | 第21-23页 |
引言 | 第23-26页 |
1.研究背景 | 第23-24页 |
2.总体设计思路 | 第24页 |
参考文献 | 第24-26页 |
技术路线 | 第26-27页 |
第一部分 ARHI基因在正常脑组织、胶质瘤标本及胶质瘤细胞系中的表达 | 第27-49页 |
前言 | 第27页 |
材料与方法 | 第27-35页 |
1.实验材料 | 第27-29页 |
2.实验方法 | 第29-35页 |
结果 | 第35-42页 |
1.ARHI基因在人脑胶质瘤中mRNA表达 | 第35-38页 |
2.人脑胶质瘤ARHI基因Western blot检测结果 | 第38-42页 |
讨论 | 第42-47页 |
1.ARHI基因的分子结构特点 | 第42-43页 |
2.ARHI基因在人体组织及肿瘤中的表达情况 | 第43-45页 |
3.本课题关于ARHI基因在胶质瘤中表达的研究 | 第45-46页 |
4.ARHI基因的失活机制 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-49页 |
第二部分 ARHI基因真核表达载体pcDNA3.1-ARHI的构建 | 第49-69页 |
前言 | 第49页 |
材料与方法 | 第49-58页 |
1.实验材料 | 第49-51页 |
2.ARHI真核表达载体克隆策略 | 第51-53页 |
3.实验方法 | 第53-58页 |
结果 | 第58-65页 |
1.RT-PCR扩增ARHI编码区片段 | 第58页 |
2.PCR产物与质粒pcDNA3.1的琼脂糖凝胶电泳分析 | 第58-59页 |
3.酶切及割胶纯化 | 第59-60页 |
4.平板培养过夜后单克隆结果 | 第60页 |
5.挑取单克隆跑胶鉴定 | 第60-61页 |
6.重组质粒双酶切鉴定 | 第61页 |
7.重组质粒测序结果 | 第61-65页 |
讨论 | 第65-67页 |
1.载体的选择 | 第65-66页 |
2.目地片段的来源 | 第66页 |
3.载体与插入片段的体外连接 | 第66-67页 |
4.阳性重组体的筛选与鉴定 | 第67页 |
参考文献 | 第67-69页 |
第三部分 重组载体pcDNA3.1-ARHI转染人胶质瘤细胞株U251 | 第69-88页 |
前言 | 第69页 |
材料与方法 | 第69-78页 |
1.实验材料 | 第69-70页 |
2.实验方法 | 第70-78页 |
结果 | 第78-84页 |
1.转染pcDNA3.1-ARHI入U251及稳定株筛选 | 第78-80页 |
2.Real Time Quantitative-PCR鉴定结果 | 第80-82页 |
3.Western blot杂交鉴定结果 | 第82-84页 |
讨论 | 第84-87页 |
1.重组表达载体转染胶质瘤细胞 | 第84-85页 |
2.阳性细胞克隆的筛选 | 第85-86页 |
3.pcDNA3.1-ARHI重组表达载体对U251中ARHI mRNA和蛋白表达量的影响 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-88页 |
第四部分 ARHI基因调控胶质瘤细胞系增殖、凋亡、迁移和侵袭的体外研究 | 第88-106页 |
前言 | 第88页 |
材料与方法 | 第88-92页 |
1.实验材料 | 第88页 |
2.实验方法 | 第88-92页 |
结果 | 第92-100页 |
1.FCM分析细胞周期 | 第92-94页 |
2.MTT法检测细胞增殖活性 | 第94-95页 |
3.TUNEL原位凋亡检测 | 第95-96页 |
4."划痕"法检测细胞迁移能力 | 第96-99页 |
5.Transwell检测细胞侵袭性 | 第99-100页 |
讨论 | 第100-104页 |
1.ARHI抑制肿瘤细胞增殖和调控细胞周期 | 第101-102页 |
2.ARHI参与信号转导和诱发肿瘤细胞凋亡 | 第102-103页 |
3.ARHI抑制肿瘤细胞侵袭、迁移 | 第103-104页 |
参考文献 | 第104-106页 |
全文总结 | 第106-107页 |
综述 | 第107-120页 |
致谢 | 第120-122页 |
攻读博士学位期间主要研究成果 | 第122页 |