| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词(ABBREVIATIONS) | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1 柑橘抗寒研究的意义 | 第11页 |
| 2 植物抗寒研究进展 | 第11-16页 |
| ·植物抗寒生理生化研究 | 第11-12页 |
| ·冷胁迫诱导基因的表达 | 第12-13页 |
| ·CBF冷诱导转录因子 | 第13-16页 |
| ·CBF转录因子及对COR基因的表达调控 | 第13-14页 |
| ·CBF基因的调节因子 | 第14-16页 |
| ·CBF转录因子在抗寒中的作用 | 第16页 |
| 3 果树抗逆基因工程的研究进展 | 第16-17页 |
| 4 植物启动子研究 | 第17-22页 |
| ·启动子的基本特点 | 第17-18页 |
| ·启动子的类型 | 第18-20页 |
| ·组成型启动子 | 第18-19页 |
| ·组织特异型启动子 | 第19页 |
| ·诱导型启动子 | 第19-20页 |
| ·启动子的研究方法 | 第20-22页 |
| ·酵母单杂交技术 | 第21页 |
| ·DNA迁移率变动试验(凝胶阻滞试验) | 第21页 |
| ·DNasel足迹试验 | 第21-22页 |
| 5 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 PTCBF1启动子的活性分析 | 第23-46页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 材料与试剂 | 第23-24页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验试剂 | 第24页 |
| 3 实验方法 | 第24-38页 |
| ·表达载体的构建 | 第24-29页 |
| ·TA克隆及正反向插入的检测 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·酶切 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及目标片断的回收 | 第26-27页 |
| ·连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌的转化及阳性克隆的增殖 | 第27-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·阳性克隆的增殖 | 第28-29页 |
| ·构建载体的检测 | 第29页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备 | 第29页 |
| ·工程菌的制备 | 第29-30页 |
| ·转化农杆菌 | 第29-30页 |
| ·菌落阳性检测及工程菌保存 | 第30页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第30-33页 |
| ·材料的准备 | 第30页 |
| ·试剂的制备 | 第30-31页 |
| ·激素和抗生素贮存液的配制 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·农杆菌的准备 | 第31页 |
| ·烟草的共培养 | 第31页 |
| ·烟草的选择培养 | 第31页 |
| ·烟草的继代选择培养 | 第31页 |
| ·烟草的生根培养 | 第31-32页 |
| ·烟草叶片总DNA的提取 | 第32页 |
| ·PCR检测烟草转基因植株 | 第32-33页 |
| ·GUS的活性检测 | 第33-35页 |
| ·烟草的组织化学染色 | 第33-34页 |
| ·GUS活性的荧光定量测定 | 第34-35页 |
| ·试剂的制备 | 第34页 |
| ·操作步骤 | 第34-35页 |
| ·GUS表达的半定量RT-PCR分析 | 第35-38页 |
| ·RT-PCR原理 | 第36页 |
| ·RNA的提取 | 第36页 |
| ·反转录 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR | 第37-38页 |
| 4 结果与分析 | 第38-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化烟草 | 第39-41页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第39-41页 |
| ·转基因烟草的低温冷诱导处理及GUS的组织化学染色 | 第41页 |
| ·GUS的活性定量分析 | 第41-43页 |
| ·GUS表达的半定量RT-PCR分析 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 PTCBF1启动子的功能元件分析 | 第46-58页 |
| 1 前言 | 第46页 |
| 2 凝胶阻滞(EMSA)基本原理 | 第46页 |
| 3 材料与试剂 | 第46-47页 |
| ·材料的准备 | 第46页 |
| ·试剂的配制 | 第46-47页 |
| 4 凝胶阻滞试验方法 | 第47-54页 |
| ·枳壳核蛋白的提取 | 第47-48页 |
| ·蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第48-50页 |
| ·基本原理 | 第48页 |
| ·器材 | 第48页 |
| ·试剂的制配 | 第48-49页 |
| ·操作步骤 | 第49-50页 |
| ·地高辛标记双链DNA | 第50-52页 |
| ·PCR扩增 | 第50-51页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第51页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第51-52页 |
| ·探针标记DNA | 第52页 |
| ·探针的定量 | 第52页 |
| ·凝胶阻滞反应 | 第52-54页 |
| 5 结果与分析 | 第54-57页 |
| ·枳核蛋白的提取及检测 | 第54页 |
| ·目的基因的PCR扩增及探针标记 | 第54-55页 |
| ·凝胶阻滞试验分析 | 第55-57页 |
| 6 讨论 | 第57-58页 |
| 第四章 总结与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 图版和说明 | 第67-69页 |
| 图版一:烟草遗传转化 | 第67-68页 |
| 图版二:GUS的组织化学染色 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |