| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表(按字母顺序排列) | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 草鱼出血病简介 | 第13-15页 |
| ·草鱼出血病的研究历史 | 第13-14页 |
| ·草鱼出血病的症状及流行情况 | 第14-15页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒的生物学特性 | 第15页 |
| ·草鱼出血病的防治方法 | 第15页 |
| 2 RNAI技术 | 第15-21页 |
| ·RNAi的发展过程 | 第16-17页 |
| ·RNAi的作用机制 | 第17-18页 |
| ·转录后水平上的RNAi机制 | 第17页 |
| ·翻译水平上的RNAi机制 | 第17-18页 |
| ·转录水平上的RNAi机制 | 第18页 |
| ·RNAi的特点 | 第18页 |
| ·siRNA的制备 | 第18-20页 |
| ·化学合成法 | 第18页 |
| ·体外转录法 | 第18页 |
| ·RNaseⅢ消化法 | 第18-19页 |
| ·siRNA表达载体 | 第19页 |
| ·siRNA表达框架 | 第19页 |
| ·慢病毒载体表达的siRNA | 第19-20页 |
| ·RNAi技术的用途 | 第20-21页 |
| 3 RNAI在水产科学中的应用 | 第21-24页 |
| ·RNAi在抑制水生动物病毒方面的应用 | 第21-23页 |
| ·抑制真鲷虹彩病毒 | 第21页 |
| ·抑制对虾白斑综合症病毒 | 第21-22页 |
| ·抑制蛙病毒 | 第22页 |
| ·抑制草鱼呼肠孤病毒 | 第22-23页 |
| ·RNAi在水产动物基因功能方面的应用 | 第23-24页 |
| 4 问题与展望 | 第24-25页 |
| 第二章 GCRV部分基因片段的克隆 | 第25-38页 |
| 1 材料与方法 | 第25-31页 |
| ·仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·材料与试剂 | 第26页 |
| ·所用软件 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-31页 |
| ·CIK细胞复苏 | 第26页 |
| ·CIK细胞传代培养 | 第26页 |
| ·GCRV在CIK细胞中增殖 | 第26-27页 |
| ·病毒的滴度测定 | 第27页 |
| ·提取病毒的RNA | 第27页 |
| ·GCRV聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-29页 |
| ·GCRV部分基因片段的克隆及测序 | 第29-31页 |
| 2 结果 | 第31-36页 |
| ·病毒滴度测定结果 | 第31-33页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第33页 |
| ·质粒检测结果 | 第33-34页 |
| ·质粒测序结果 | 第34-35页 |
| ·测序后比对结果 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 4 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 化学合成的SIRNA在细胞上抑制GCRV复制 | 第38-56页 |
| 1 材料与方法 | 第38-42页 |
| ·仪器与设备 | 第38页 |
| ·材料与试剂 | 第38页 |
| ·所用软件 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-42页 |
| ·设计并合成siRNA | 第38-40页 |
| ·脂质体转染 | 第40页 |
| ·转染siRNA对GCRV的抑制作用 | 第40-41页 |
| ·转染siRNA对病毒滴度的影响 | 第41页 |
| ·转染siRNA对病毒mRNA水平的影响 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-53页 |
| ·siRNA设计结果 | 第42-43页 |
| ·转染siRNA对病毒的抑制作用 | 第43-45页 |
| ·转染siRNA对病毒滴度的影响 | 第45-50页 |
| ·病毒感染阳性对照的滴度测定结果 | 第45-46页 |
| ·转染siRNA-RdRp1286的细胞培养液滴度测定结果 | 第46-47页 |
| ·转染siRNA-RdRp1441的细胞培养液滴度测定结果 | 第47-48页 |
| ·转染siRNA-OCP117的细胞培养液滴度测定结果 | 第48-49页 |
| ·转染siRNA阴性对照的细胞培养液滴度测定结果 | 第49-50页 |
| ·转染siRNA对GCRV mRNA水平的影响 | 第50-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 4 小结 | 第55-56页 |
| 第四章 SIRNA表达质粒的构建 | 第56-67页 |
| 1 实验材料 | 第56-57页 |
| ·仪器与设备 | 第56页 |
| ·材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·所用软件 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-60页 |
| ·GCRV基因特异性siRNA的设计 | 第57页 |
| ·siRNA表达质粒的构建 | 第57-60页 |
| ·插入片段的准备 | 第57页 |
| ·线性质粒与插入片段的连接 | 第57页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第57-58页 |
| ·质粒提取 | 第58-59页 |
| ·表达质粒的鉴定 | 第59-60页 |
| ·表达质粒的脂质体转染 | 第60页 |
| ·脂质体转染 | 第60页 |
| ·转染表达质粒对细胞生长的影响 | 第60页 |
| ·质粒转染的检测 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-65页 |
| ·含GCRV siRNA特异序列的寡核苷酸单链的设计与合成 | 第60-62页 |
| ·表达质粒的PCR鉴定 | 第62页 |
| ·表达质粒的测序鉴定 | 第62-63页 |
| ·转染表达质粒对CIK细胞生长的影响 | 第63-64页 |
| ·表达质粒转染的检测结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 结语 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录:研究生期间发表的文章 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
