| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 绪论 | 第12-27页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·链霉菌次级代谢产物生物合成研究进展 | 第12-16页 |
| ·聚酮合成酶(Polyketide synthase,PKS) | 第13-15页 |
| ·非核糖体肽合酶(Non-ribosomal peptide synthase,NRPS) | 第15-16页 |
| ·链霉菌次级代谢调控研究进展 | 第16-25页 |
| ·途径特异性调控 | 第16-18页 |
| ·全局多效调控 | 第18-25页 |
| ·纳他霉素的生物合成研究进展 | 第25-27页 |
| 2 恰塔努加链霉菌中纳他霉素生物合成及途径特异性调控 | 第27-61页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料 | 第27-31页 |
| ·菌种 | 第27-28页 |
| ·质粒载体 | 第28-29页 |
| ·引物 | 第29页 |
| ·主要仪器与设备 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-42页 |
| ·大肠杆菌质粒抽提 | 第31页 |
| ·大肠杆菌Cosmid抽提 | 第31页 |
| ·核酸片段割胶回收 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| ·大肠杆菌中重组蛋白表达 | 第32页 |
| ·大肠杆菌中重组蛋白纯化 | 第32-33页 |
| ·S.chattanoogensis基因组提取 | 第33-34页 |
| ·S.chattanoogensis基因组文库构建 | 第34页 |
| ·S.chattanoogensis孢子悬液的制备 | 第34页 |
| ·S.chattanoogensis生物指示实验 | 第34-35页 |
| ·S.chattanoogensis摇瓶发酵 | 第35页 |
| ·S.chattanoogensis生长曲线测定 | 第35页 |
| ·S.chattanoogensis-E.coli接合转导 | 第35-36页 |
| ·PCR-targeting基因敲除 | 第36-37页 |
| ·Southern blotting | 第37-39页 |
| ·凝胶阻滞电泳 | 第39-40页 |
| ·RNA提取 | 第40-41页 |
| ·5' RACE | 第41页 |
| ·纳他霉素生物指示实验 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-59页 |
| ·恰塔努加链霉菌中纳他霉素生物合成基因簇克隆 | 第42-46页 |
| ·途径特异性止调控基因scnRⅠ和scnRⅡ的敲除与验证 | 第46-47页 |
| ·scnRⅠ和scnRⅡ突变株的回补菌株构建 | 第47-48页 |
| ·scnRⅠ和scnRⅡ的敲除突变株的表型分析 | 第48页 |
| ·scnRⅠ和scnRⅡ转录起始位点的鉴定 | 第48-49页 |
| ·纳他霉素生物合成基因簇转录结构分析 | 第49-51页 |
| ·scnRⅠ和scnRⅡ的敲除突变株中基因簇的转录水平分析 | 第51-52页 |
| ·ScnRⅠ和ScnRⅡ的正调控作用的分子机制研究 | 第52-55页 |
| ·纳他霉素生物合成基因簇的比较基因簇分析 | 第55-59页 |
| ·小结与讨论 | 第59-61页 |
| 3 多效调控因子AdpA-ch对纳他霉素的正调控作用 | 第61-77页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·菌种 | 第61-62页 |
| ·质粒载体 | 第62-63页 |
| ·引物 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·方法 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-75页 |
| ·adpA-Ch的克隆 | 第63-67页 |
| ·adpA-Ch的敲除突变株的构建与验证 | 第67-69页 |
| ·adpA-Ch的敲除突变株的表型分析 | 第69-70页 |
| ·adpA-Ch的敲除对纳他霉素产量的影响 | 第70-71页 |
| ·adpA-Ch的转录水平分析 | 第71页 |
| ·adpA-Ch的转录起始位点的鉴定 | 第71-73页 |
| ·adpA-Ch的突变株中scnRI和scnRII的转录水平分析 | 第73-74页 |
| ·adpA-Ch对scnRl的间接调控 | 第74-75页 |
| ·小结与讨论 | 第75-77页 |
| 4 丁内酯调控系统及其对纳他霉素生物合成的影响 | 第77-120页 |
| ·引言 | 第77-78页 |
| ·材料与方法 | 第78-84页 |
| ·菌种 | 第78-79页 |
| ·质粒载体 | 第79-80页 |
| ·引物 | 第80页 |
| ·培养基 | 第80页 |
| ·方法 | 第80页 |
| ·发酵液中纳他霉素产量测定 | 第80-81页 |
| ·蛋白质二维电泳方法 | 第81-84页 |
| ·结果 | 第84-114页 |
| ·恰塔努加链霉菌丁内酯系统相关基因scgRAX的克隆 | 第84-85页 |
| ·scgRAX各基因敲除突变株的构建及验证 | 第85-89页 |
| ·scgR,scgA和scgX各敲除突变株的表型分析 | 第89-92页 |
| ·scgRAX敲除突变株的摇瓶发酵动力学 | 第92-94页 |
| ·scgAX敲除突变株的碳源依赖性表型 | 第94-95页 |
| ·丁内酯信号信号分子的生物合成与调控 | 第95-103页 |
| ·ScgR直接下游靶基因的鉴定 | 第103-106页 |
| ·scgA突变株中adpA-ch,scnRⅠ与scnRⅡ的转录水平分析 | 第106-108页 |
| ·比较蛋白质组学分析揭示丁内酯调控元 | 第108-114页 |
| ·小结与讨论 | 第114-120页 |
| ·CHB的生物合成及其调控 | 第114-115页 |
| ·CHB调控元 | 第115-119页 |
| ·CHB对纳他霉素生物合成的影响 | 第119-120页 |
| 5 本文研究成果及展望 | 第120-121页 |
| ·本文研究成果 | 第120页 |
| ·展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-125页 |
| 附录 | 第125-133页 |
| 攻读博士学位期间的主要研究成果 | 第133-134页 |
| 致谢 | 第134页 |
