| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 本论文缩略词表 | 第12-18页 |
| 第一章 前言——叶的发育及调控机理 | 第18-35页 |
| 第一节 叶的发生 | 第18-24页 |
| 一 KNOX基因家族 | 第19-21页 |
| 二 AS1/AS2复合体 | 第21-23页 |
| 三 AUXIN和叶的发育 | 第23-24页 |
| 第二节 叶片极性的建立 | 第24-33页 |
| 一 YABBY基因家族 | 第25-27页 |
| 二 KANADI基因家族 | 第27-29页 |
| 三 Class Ⅲ HD-ZIP基因家族和miRNA165/166 | 第29-31页 |
| 四 ARF3/4和TAS3 | 第31-33页 |
| 第三节 基因家族之间的相互调节关系 | 第33-34页 |
| 第四节 展望 | 第34-35页 |
| 第二章 ATSRS7基因的克隆 | 第35-45页 |
| 第一节 前言 | 第35页 |
| 第二节 ATSRS7基因的克隆 | 第35-45页 |
| 一 材料和方法 | 第35-41页 |
| 1 ATSRS7基因组及CDNA的分离及测序分析 | 第35-40页 |
| ·拟南芥基因组提取 | 第35-36页 |
| ·AtSRS7 cDNA克隆 | 第36-38页 |
| ·PCR片段的回收和连接 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第40页 |
| ·碱法提取重组质粒 | 第40页 |
| 2 基因序列的测定 | 第40页 |
| 3 序列分析 | 第40-41页 |
| 二 实验结果 | 第41-45页 |
| 1 ATSRS7基因蛋白图谱 | 第41页 |
| 2 SRS7基因组的克隆 | 第41-42页 |
| 3 SRS7cDNA的克隆 | 第42页 |
| 4 缺失基因SRS7510和SRS7511的克隆 | 第42-43页 |
| 5 基因的鉴定与测序 | 第43-45页 |
| 第三章 ATSRS7基因在拟南芥中的过量表达和表型分析 | 第45-56页 |
| 第一节 前言 | 第45页 |
| 第二节 ATSRS7基因的过量表达和表型分析 | 第45-54页 |
| 一 材料和方法 | 第45-50页 |
| 1 ATSRS7基因全长及缺失片段构建到过量表达载体PBIM | 第45-50页 |
| ·pBIm载体和AtSRS7基因全长及缺失片段酶切 | 第45-46页 |
| ·酶切回收片段 | 第46页 |
| ·线性化载体pBIm去磷酸化 | 第46-47页 |
| ·AtSRS7基因全长及缺失片段构建到过量表达载体pBIm | 第47页 |
| ·农杆菌的转化及转基因植株的获得 | 第47-50页 |
| 二 实验结果 | 第50-54页 |
| 1 过量表达载体为本实验室改造的载体PBIM | 第50页 |
| 2 农杆菌的转化和鉴定 | 第50-51页 |
| 3 过量表达材料SRS7OX表型分析和验证 | 第51-54页 |
| ·SRS7OX表型 | 第51-52页 |
| ·SRS7OX和WT在植株高度上的区别 | 第52页 |
| ·SRS7OX和WT开花时间上的区别 | 第52-53页 |
| ·SRS7OX和WT及与shi突变体在叶卷曲上的区别 | 第53页 |
| ·RT-PCR分析SRS7OX、WT之间区别研究SRS7的表达情况 | 第53-54页 |
| ·SRS7缺失片段过量表达突变体35S::SRS7510和35S::SRS7511表型分析 | 第54页 |
| 第三节 本章讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 ATSRS7表达模式研究 | 第56-62页 |
| 第一节 引言 | 第56页 |
| 第二节 PSRS7::GUS植株的构建及表达模式 | 第56-62页 |
| 一 材料和方法 | 第56-59页 |
| 1 ATSRS7启动子的克隆 | 第56-58页 |
| 2 拟南芥的转化 | 第58页 |
| 3 GUS染色研究ATSRS7的表达模式 | 第58-59页 |
| 二 实验结果 | 第59-62页 |
| 1 SRS7PRO序列片段的克隆 | 第59-60页 |
| 2 SRS7PRO序列片段鉴定与测序 | 第60页 |
| 3 ATSRS7基因表达模式分析 | 第60-61页 |
| 4 PBI101.2模式图 | 第61-62页 |
| 第五章 ATSRS7与AUXIN、KNOX基因家族相互关系 | 第62-76页 |
| 第一节 引言 | 第62页 |
| 第二节 分析SRS7OX中生长素的分布和KNOX家族表达的变化 | 第62-74页 |
| 一 材料和方法 | 第62-68页 |
| 1 DR5::GUS和KNAT2::GUS材料的获得 | 第62页 |
| 2 GUS染色分析 | 第62-63页 |
| 3 RT-PCR分析下游基因 | 第63-66页 |
| 4 酵母双杂交实验方法 | 第66-68页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第66页 |
| ·重组质粒转化酵母AH109步骤 | 第66-67页 |
| ·LacZ报告基因表达检测 | 第67-68页 |
| 二 实验结果 | 第68-74页 |
| 1 SRS7OX和WT中AUXIN和KNAT2表达模式 | 第68-71页 |
| ·利用DR5::GUS分析SRS7OX和WT幼苗中生长素分布 | 第68-69页 |
| ·利用DR5::GUS分析SRS7OX和WT成熟叶片中生长素分布区别 | 第69-70页 |
| ·利用KNAT2::GUS分析SRS7OX和WT小苗中KNAT2分布区别 | 第70页 |
| ·利用KNAT2::GUS分析SRS7OX和WT成熟叶片中KNAT2分布区别 | 第70-71页 |
| 2 RT-PCR分析下游基因 | 第71-73页 |
| ·RT-PCR分析SRS7OX和WT成熟叶片中KNOX基因等相关基因的表达 | 第71-72页 |
| ·RT-PCR分析SRS7OX和WT成熟叶片中TCP家族部分基因的表达 | 第72-73页 |
| 3 利用酵母双杂交分析SRS7与KNOX家族及AS1之间的相互作用 | 第73-74页 |
| 第三节 总讨论 | 第74-76页 |
| 第六章 CAT家族在叶的发育中的酶活功能研究 | 第76-91页 |
| 第一节 引言 | 第76-77页 |
| 第二节 CAT家族在叶的发育中的酶活功能研究 | 第77-88页 |
| 一 材料和方法 | 第77-84页 |
| 1 CAT1、CAT2、CAT3三个突变体获得 | 第77-78页 |
| 2 PCAT1::CAT2,PCAT3::CAT2,PCAT2::CAT1,PCAT2::CAT3转CAT2 | 第78页 |
| 3 RT-PCR分析各突变体及转基因植株过氧化氢酶的表达 | 第78-80页 |
| ·前面的方法提取植株总RNA,RT-PCR分析表达模式 | 第78-79页 |
| ·RT-PCR引物设计 | 第79-80页 |
| 4 各种突变体及转基因植株过氧化氢酶活性检测 | 第80-83页 |
| 5 WESTERN分析蛋白水平方法 | 第83-84页 |
| 二 实验结果 | 第84-88页 |
| 1 各突变体及转基因植株表型分析 | 第84-85页 |
| 2 RT-PCR分析CAT家族突变体及转基因植株成熟叶片CAT家族的表达情况 | 第85-86页 |
| 3 转基因植株表型分析 | 第86页 |
| 4 CAT家族转基因植株RT-PCR验证 | 第86页 |
| 5 过氧化氢酶酶活分析各突变体花中CAT家族的蛋白活性 | 第86-87页 |
| 6 过氧化氢酶酶活分析各突变体及转基因植株成熟叶片CAT家族的蛋白活性 | 第87-88页 |
| 7 过氧化氢酶总体酶活分析 | 第88页 |
| 本章小结 | 第88-89页 |
| 第三节 本章讨论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
