| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第15-21页 |
| 1.1 骨关节炎 | 第15页 |
| 1.2 骨关节炎与软骨细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 1.3 骨关节炎与软骨细胞自噬 | 第16-17页 |
| 1.4 炎症相关信号通路与软骨细胞凋亡 | 第17-18页 |
| 1.5 姜黄素的药理作用 | 第18-19页 |
| 1.6 姜黄素与细胞自噬和凋亡 | 第19页 |
| 1.7 姜黄素与骨关节炎 | 第19-21页 |
| 第二章 姜黄素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡作用的观察 | 第21-40页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 试剂材料与主要仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.2 试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 磷酸盐缓冲液(1×PBS)的配制 | 第23页 |
| 2.2.2.2 细胞冻存液的配制 | 第23页 |
| 2.2.2.3 Western Blot相关缓冲液配制 | 第23-24页 |
| 2.2.2.4 DMEM-F12完全培养基的配制 | 第24页 |
| 2.2.3 Ⅱ型胶原酶的配制 | 第24页 |
| 2.2.4 SD大鼠软骨细胞的提取与培养 | 第24-25页 |
| 2.2.5 鉴定软骨细胞(Ⅱ型胶原免疫荧光检测) | 第25-26页 |
| 2.2.5.1 细胞爬片 | 第25页 |
| 2.2.5.2 软骨细胞Ⅱ型胶原免疫荧光检测 | 第25-26页 |
| 2.2.6 IL-1β与姜黄素对软骨细胞活力的影响比较 | 第26-27页 |
| 2.2.6.1 细胞准备 | 第26页 |
| 2.2.6.2 姜黄素、IL-1β处理软骨细胞 | 第26页 |
| 2.2.6.3 软骨细胞活力检测 | 第26-27页 |
| 2.2.7 IL-1β诱导软骨细胞凋亡 | 第27-28页 |
| 2.2.7.1 细胞准备 | 第27页 |
| 2.2.7.2 细胞爬片 | 第27页 |
| 2.2.7.3 软骨细胞的凋亡诱导和姜黄素等处理 | 第27-28页 |
| 2.2.7.4 处理软骨细胞凋亡检测(流式细胞仪) | 第28页 |
| 2.2.7.5 处理软骨细胞凋亡检测(TUNEL染色法) | 第28页 |
| 2.2.8 软骨细胞凋亡分子标志物检测 | 第28-31页 |
| 2.2.8.1 蛋白提取 | 第28-29页 |
| 2.2.8.2 蛋白浓度测定(BCA法) | 第29页 |
| 2.2.8.3 Western Blot检测Caspase-3和Bcl-2表达 | 第29-31页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第31-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-38页 |
| 2.3.1 软骨细胞特异性Ⅱ型胶原表达鉴定 | 第32页 |
| 2.3.2 IL-1β和姜黄素对软骨细胞增殖活力的影响 | 第32-34页 |
| 2.3.3 姜黄素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用 | 第34页 |
| 2.3.4 活化Caspase 3和Bcl-2的表达 | 第34-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 2.5 本章结论 | 第39-40页 |
| 第三章 姜黄素对软骨细胞自噬水平的影响 | 第40-55页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料和方法 | 第40-48页 |
| 3.2.1 主要仪器和试剂材料 | 第40-42页 |
| 3.2.2 试剂配制 | 第42-43页 |
| 3.2.2.1 磷酸盐缓冲液(1×PBS)的配制 | 第42页 |
| 3.2.2.2 细胞冻存液的配制 | 第42页 |
| 3.2.2.3 Western Blot相关缓冲液配制 | 第42-43页 |
| 3.2.2.4 DMEM-F12完全培养基的配制 | 第43页 |
| 3.2.3 Ⅱ型胶原酶的配制 | 第43页 |
| 3.2.4 SD大鼠软骨细胞的提取与培养 | 第43-44页 |
| 3.2.5 姜黄素对软骨细胞内自噬水平的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.5.1 细胞准备与爬片 | 第44页 |
| 3.2.5.2 姜黄素、IL-1β处理软骨细胞 | 第44-45页 |
| 3.2.6 软骨细胞内自噬水平的检测 | 第45-46页 |
| 3.2.6.1 透射电镜 | 第45-46页 |
| 3.2.6.2 MDC染色 | 第46页 |
| 3.2.7 软骨细胞自噬分子标志物的表达 | 第46-48页 |
| 3.2.7.1 蛋白提取 | 第46页 |
| 3.2.7.2 蛋白浓度测定(BCA法) | 第46-47页 |
| 3.2.7.3 Western Blot检测LC3-Ⅱ和Beclin-1表达 | 第47-48页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第48页 |
| 3.3 结果 | 第48-53页 |
| 3.3.1 不同处理组软骨细胞内自噬小泡的形成 | 第48-51页 |
| 3.3.2 不同处理组软骨细胞自噬分子标志物LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达 | 第51-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53页 |
| 3.5 本章结论 | 第53-55页 |
| 第四章 ERK1/2信号通路在姜黄素调节软骨细胞自噬中作用的观察 | 第55-69页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料和方法 | 第55-62页 |
| 4.2.1 主要仪器和试剂材料 | 第55-57页 |
| 4.2.2 试剂配制 | 第57-58页 |
| 4.2.2.1 磷酸盐缓冲液(1×PBS)的配制 | 第57页 |
| 4.2.2.2 细胞冻存液的配制 | 第57-58页 |
| 4.2.2.3 Western Blot相关缓冲液配制 | 第58页 |
| 4.2.2.4 DMEM-F12完全培养基的配制 | 第58页 |
| 4.2.3 Ⅱ型胶原酶的配制 | 第58页 |
| 4.2.4 SD大鼠软骨细胞的提取与培养 | 第58-59页 |
| 4.2.5 软骨细胞内ERK1/2信号通路相关蛋白的检测 | 第59-62页 |
| 4.2.5.1 软骨细胞的处理 | 第59页 |
| 4.2.5.2 蛋白提取 | 第59-60页 |
| 4.2.5.3 蛋白浓度测定(BCA法) | 第60页 |
| 4.2.5.4 Western Blot检测磷酸化ERK1/2、LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达 | 第60-62页 |
| 4.2.6 统计学分析 | 第62页 |
| 4.3 结果 | 第62-67页 |
| 4.3.1 姜黄素处理软骨细胞后磷酸化ERK1/2的表达 | 第62页 |
| 4.3.2 IL-1β和/或姜黄素处理软骨细胞后磷酸化ERK1/2的表达 | 第62-65页 |
| 4.3.3 姜黄素和/或U0126处理软骨细胞后LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达 | 第65-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.5 本章结论 | 第68-69页 |
| 全文结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 攻读硕士研究生期间科研成果 | 第80-82页 |
