| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 紫杉醇简介 | 第13页 |
| 1.2 紫杉醇的药源途径 | 第13-15页 |
| 1.3 紫杉醇生物合成途径及相关基因 | 第15-17页 |
| 1.4 改良紫杉醇产生菌的途径 | 第17-19页 |
| 1.4.1 优化发酵条件 | 第17页 |
| 1.4.2 诱变育种 | 第17-18页 |
| 1.4.3 基因工程育种 | 第18-19页 |
| 1.5 根癌农杆菌介导的真菌遗传转化 | 第19-20页 |
| 1.6 假定蛋白基因 | 第20页 |
| 1.7 本研究的内容、目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 候选基因A10182和A10251的克隆及生物信息学分析 | 第22-32页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料、仪器及试剂 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌种及质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2.4 主要试剂、药品及耗材 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 枝状枝孢霉MD2基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 候选基因A10182和A10251的克隆 | 第25-27页 |
| 2.3.3 候选基因A10182和A10251的生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.4 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.4.1 候选基因A10182和A10251响应MeJA诱导的表达特征 | 第27页 |
| 2.4.2 候选基因A10182和A10251的克隆与分析 | 第27-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-32页 |
| 第三章 超表达候选基因A10182和A10251的转基因菌株的构建 | 第32-52页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 材料、仪器及试剂 | 第32-35页 |
| 3.2.1 菌种及质粒 | 第32页 |
| 3.2.2 培养基 | 第32-33页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.2.4 主要试剂、药品及耗材 | 第33-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-44页 |
| 3.3.1 候选基因A10182和A10251的超表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.3.2 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第37-39页 |
| 3.3.3 转基因菌株的筛选及平板验证 | 第39页 |
| 3.3.4 Southernblot分析转基因菌株中候选基因的整合情况 | 第39-42页 |
| 3.3.5 qRT-PCR分析转基因菌株中候选基因的表达量 | 第42-44页 |
| 3.4 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.4.1 超表达候选基因A10182和A10251的转基因菌株的构建 | 第44-48页 |
| 3.4.2 转基因菌株的分子检测 | 第48-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 转基因菌株的紫杉烷类含量的检测与分析 | 第52-60页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 材料、仪器及试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.1 培养基 | 第52页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第52页 |
| 4.2.3 主要试剂、药品及耗材 | 第52-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.3.1 紫杉烷类代谢产物的提取 | 第53页 |
| 4.3.2 HPLC检测转基因菌株中紫杉烷类代谢产物的变化 | 第53-54页 |
| 4.4 实验结果 | 第54-59页 |
| 4.4.1 标准品的HPLC检测 | 第54-56页 |
| 4.4.2 转基因菌株中紫杉烷类含量的检测与分析 | 第56-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 5.1 主要结论 | 第60-61页 |
| 5.2 本文创新之处 | 第61页 |
| 5.3 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 硕士期间发表的学术论文及专利申请 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
