| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第6-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 木聚糖 | 第12-14页 |
| 1.1.1 半纤维素与木聚糖 | 第12-13页 |
| 1.1.2 木聚糖的酶解 | 第13-14页 |
| 1.2 木聚糖酶的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的多样性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的分类 | 第15页 |
| 1.2.3 第十家族(GH10)及第十一家族(GH11)木聚糖酶 | 第15-16页 |
| 1.2.4 木聚糖酶的催化机制 | 第16-18页 |
| 1.2.5 木聚糖酶分子结构域 | 第18-19页 |
| 1.2.5.1 催化结构域 | 第18页 |
| 1.2.5.2 碳水化合物结合域 | 第18-19页 |
| 1.2.5.3 连接区和重复序列 | 第19页 |
| 1.2.5.4 热稳定区 | 第19页 |
| 1.2.6 木聚糖酶的应用 | 第19-21页 |
| 1.2.6.1 在食品工业上的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.6.2 在饲料工业上的应用 | 第20页 |
| 1.2.6.3 在造纸工业上的应用 | 第20页 |
| 1.2.6.4 木聚糖酶在其它方面的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.7 木聚糖酶的分子克隆 | 第21页 |
| 1.3 课题选题依据及研究意义 | 第21-22页 |
| 1.4 课题研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 产木聚糖酶真菌的筛选、鉴定及木聚糖酶基因保守区序列的克隆 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 样品 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 引物合成及DNA测序 | 第25页 |
| 2.1.5 常用缓冲液和储液 | 第25页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.1.7 培养基 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 产木聚糖酶真菌的筛选及分离 | 第27页 |
| 2.2.1.1 样品处理及真菌筛选 | 第27页 |
| 2.2.1.2 产木聚糖酶菌株的确定 | 第27页 |
| 2.2.2 菌株的鉴定 | 第27-30页 |
| 2.2.2.1 形态学观察 | 第27页 |
| 2.2.2.2 真菌基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 18S rDNA及ITS的PCR扩增 | 第28页 |
| 2.2.2.4 扩增产物的回收与纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.2.6 回收片段的连接和转化 | 第29-30页 |
| 2.2.2.7 菌液验证及测序 | 第30页 |
| 2.2.3 木聚糖酶基因保守区序列的克隆 | 第30-32页 |
| 2.2.3.1 真菌基因组的提取及简并引物设计 | 第30-31页 |
| 2.2.3.2 GH10和GH11木聚糖酶基因保守区序列的克隆 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-40页 |
| 2.3.1 产木聚糖酶真菌的筛选 | 第32页 |
| 2.3.2 菌株MF10和MF13的鉴定 | 第32-37页 |
| 2.3.2.1 形态观察 | 第32-34页 |
| 2.3.2.2 18S rDNA及ITS序列分析 | 第34-37页 |
| 2.3.3 木聚糖保守区序列的获得与分析 | 第37-40页 |
| 2.4 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 新木聚糖酶基因全长序列的克隆及分析 | 第41-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 引物合成及DNA测序 | 第41-42页 |
| 3.1.4 常用缓冲液和储液 | 第42页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第42页 |
| 3.1.6 培养基 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 GH10及GH11木聚糖酶基因全长序列的获得 | 第42-47页 |
| 3.2.1.1 目标基因片段的选取 | 第42页 |
| 3.2.1.2 特异性引物(SP)的设计 | 第42-44页 |
| 3.2.1.3 TAIL-PCR的反应体系及程序 | 第44-46页 |
| 3.2.1.4 目标产物的回收、连接、转化和测序 | 第46页 |
| 3.2.1.5 木聚糖酶基因全长序列的拼接和初步分析 | 第46-47页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第47页 |
| 3.2.3 cDNA第一链的合成 | 第47-48页 |
| 3.2.4 木聚糖酶基因的克隆及序列分析 | 第48-49页 |
| 3.2.4.1 特异引物的设计 | 第48页 |
| 3.2.4.2 木聚糖酶基因的PCR扩增 | 第48-49页 |
| 3.2.4.3 木聚糖酶基因的回收、连接、转化和测序 | 第49页 |
| 3.2.4.4 木聚糖酶基因的序列分析 | 第49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-66页 |
| 3.3.1 木聚糖酶基因全长序列的获得与扩增 | 第50-52页 |
| 3.3.2 木聚糖酶基因内含子序列的分析 | 第52-54页 |
| 3.3.3 木聚糖酶基因全长序列的分析 | 第54-59页 |
| 3.3.4 木聚糖酶氨基酸序列相关分析 | 第59-66页 |
| 3.3.4.1 氨基酸序列比对分析与系统发育分析 | 第59-63页 |
| 3.3.4.2 糖基化修饰预测分析 | 第63-64页 |
| 3.3.4.3 蛋白质结构预测 | 第64-66页 |
| 3.4 小结 | 第66-68页 |
| 第四章 新木聚糖酶的表达、纯化及性质研究 | 第68-103页 |
| 4.1 实验材料 | 第68-70页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第68页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第68页 |
| 4.1.3 引物合成及DNA测序 | 第68页 |
| 4.1.4 常用缓冲液和储液 | 第68-69页 |
| 4.1.5 主要仪器设备 | 第69页 |
| 4.1.6 培养基 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-80页 |
| 4.2.1 毕赤酵母表达重组质粒的构建 | 第70-72页 |
| 4.2.1.1 木聚糖酶基因的克隆、酶切与连接 | 第70-72页 |
| 4.2.1.2 重组质粒转化大肠杆菌与验证 | 第72页 |
| 4.2.2 重组毕赤酵母菌株的构建 | 第72-74页 |
| 4.2.2.1 重组质粒的线性化 | 第72-73页 |
| 4.2.2.2 毕赤酵母X33感受态细胞的制备 | 第73页 |
| 4.2.2.3 电转化X33 | 第73-74页 |
| 4.2.3 重组毕赤酵母菌株的筛选 | 第74页 |
| 4.2.4 酶活测定 | 第74页 |
| 4.2.5 重组酶的大量诱导和分离纯化 | 第74-77页 |
| 4.2.5.1 中空纤维浓缩和硫酸铵沉淀 | 第75页 |
| 4.2.5.2 亲和镍柱纯化 | 第75-76页 |
| 4.2.5.3 SDS-PAGE分析及重组酶XynMF13-GH10的去糖基化处理 | 第76页 |
| 4.2.5.4 BCA法测定蛋白浓度 | 第76-77页 |
| 4.2.6 重组酶性质测定 | 第77-79页 |
| 4.2.6.1 重组酶最适反应pH及pH稳定性测定 | 第77页 |
| 4.2.6.2 重组酶最适反应温度及热稳定性测定 | 第77-78页 |
| 4.2.6.3 不同金属离子及化学试剂对重组酶酶活的影响 | 第78页 |
| 4.2.6.4 重组酶受不同NaCl浓度的影响及其盐耐受性 | 第78页 |
| 4.2.6.5 重组酶比活的测定 | 第78页 |
| 4.2.6.6 重组酶K_m、V_(max)和k_(cat)测定 | 第78-79页 |
| 4.2.6.7 重组酶XynMF13-GH10对不可溶底物的降解和结合分析 | 第79页 |
| 4.2.6.8 重组酶降解木聚糖产物分析 | 第79页 |
| 4.2.7 重组酶在馒头制作的初步探究 | 第79-80页 |
| 4.3 结果与分析 | 第80-100页 |
| 4.3.1 重组酶的分离纯化分析 | 第80-82页 |
| 4.3.2 重组酶rXynMF13-GH10酶学性质分析 | 第82-88页 |
| 4.3.2.1 重组酶rXynMF13-GH10基本酶学性质 | 第82-84页 |
| 4.3.2.2 不同金属离子及化学试剂对重组酶rXynMF13-GH10活性的影响 | 第84-85页 |
| 4.3.2.3 重组酶rXynMF13-GH10受不同NaCl浓度的影响和盐耐受性 | 第85-86页 |
| 4.3.2.4 重组酶rXynMF13-GH10 K_m、V_(max)和K_(cat)的测定 | 第86页 |
| 4.3.2.5 重组酶rXynMF13-GH10对不可溶底物的降解和结合 | 第86-87页 |
| 4.3.2.6 重组酶rXynMF13-GH10降解木聚糖产物分析 | 第87-88页 |
| 4.3.3 重组酶rXynMF10-GH11和酶学性质分析 | 第88-93页 |
| 4.3.3.1 重组酶rXynMF10-GH11基本酶学性质 | 第88-90页 |
| 4.3.3.2 不同金属离子及化学试剂对重组酶rXynMF10-GH11活性的影响 | 第90-91页 |
| 4.3.3.3 重组酶rXynMF10-GH11受不同NaCl浓度的影响和盐耐受性 | 第91页 |
| 4.3.3.4 重组酶rXynMF10-GH11 K_m和V_(max)和K_(cat)的测定 | 第91-92页 |
| 4.3.3.5 重组酶rXynMF10-GH11降解木聚糖产物分析 | 第92-93页 |
| 4.3.4 重组酶rXynMF13-GH11和酶学性质分析 | 第93-98页 |
| 4.3.4.1 重组酶rXynMF13-GH11基本酶学性质 | 第93-95页 |
| 4.3.4.2 不同金属离子及化学试剂对重组酶rXynMF13-GH11活性的影响 | 第95页 |
| 4.3.4.3 重组酶rXynMF13-GH11受不同NaCl浓度的影响和盐耐受性 | 第95-96页 |
| 4.3.4.4 重组酶rXynMF13-GH11 K_m、V_(max)和k_(cat)的测定 | 第96-97页 |
| 4.3.4.5 重组酶rXynMF13-GH11降解木聚糖产物分析 | 第97-98页 |
| 4.3.5 重组酶在馒头制作中的应用 | 第98-100页 |
| 4.4 小结 | 第100-103页 |
| 结论与展望 | 第103-106页 |
| 结论 | 第103-105页 |
| 展望 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简历 | 第115页 |
