| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-28页 |
| 1 乙偶姻的性质与应用 | 第14页 |
| 1.1 乙偶姻的性质 | 第14页 |
| 1.2 乙偶姻的应用 | 第14页 |
| 2 2,3- 丁二醇的性质与应用 | 第14-15页 |
| 2.1 2,3-丁二醇的性质 | 第14-15页 |
| 2.2 2,3-丁二醇的应用 | 第15页 |
| 3 粘质沙雷氏菌概述 | 第15-16页 |
| 4 微生物生产乙偶姻及2,3-丁二醇的代谢途径 | 第16-19页 |
| 4.1 生产乙偶姻及2,3-丁二醇菌株 | 第16-17页 |
| 4.2 微生物合成乙偶姻和2,3-丁二醇的途径 | 第17-19页 |
| 4.3 乙偶姻及2,3-丁二醇新陈代谢的生理意义 | 第19页 |
| 5 乙偶姻和2,3-丁二醇异构体及其形成机制 | 第19-27页 |
| 5.1 乙偶姻和2,3-丁二醇异构体概述 | 第19-21页 |
| 5.2 乙偶姻和2,3-丁二醇异构体生成机制 | 第21-26页 |
| 5.3 不同构型的乙偶姻及2,3-丁二醇生物制造实现方法 | 第26-27页 |
| 6 论文的研究意义和研究内容 | 第27-28页 |
| 第一章 过表达2,3-丁二醇脱氢酶对2,3-丁二醇发酵影响研究 | 第28-45页 |
| 1 材料与方法 | 第28-39页 |
| 1.1 材料 | 第28-29页 |
| 1.2 方法 | 第29-39页 |
| 2 实验结果 | 第39-44页 |
| 2.1 BDH基因的克隆 | 第39页 |
| 2.2 pPbudK-BDH表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.3 BDH在S.marcescens H30中的表达情况分析 | 第40-41页 |
| 2.4 S.marcescens H30和S.marcescens H30-BDH在发酵过程中BDH活性分析 | 第41页 |
| 2.5 S.marcescens H30和S.marcescens H30-BDH在发酵过程中细胞内NADH、NAD~+及NADH/NAD~+变化分析 | 第41-42页 |
| 2.6 S.marcescens H30和S.marcescens H30-BDH在发酵过程中菌体生长、耗糖及各代谢产物变化分析 | 第42-44页 |
| 3 小结与结论 | 第44-45页 |
| 第二章 S.marcescens H30中meso-BDH的异源表达和催化特性研究 | 第45-58页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 1.1 材料 | 第45-46页 |
| 1.2 方法 | 第46-49页 |
| 2 实验结果 | 第49-56页 |
| 2.1 meso-BDH基因克隆 | 第49页 |
| 2.2 meso-BDH基因重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 2.3 重组meso-BDH的诱导表达和纯化 | 第50-51页 |
| 2.4 meso-BDH活性测定 | 第51页 |
| 2.5 meso-BDH底物特异性及动力学分析 | 第51-52页 |
| 2.6 pH和温度对meso-BDH活性的影响 | 第52-53页 |
| 2.7 金属离子对meso-BDH活性的影响 | 第53-54页 |
| 2.8 meso-BDH催化的立体选择性 | 第54-56页 |
| 3 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第三章 marcescens H30中GDH的异源表达和催化特性研究 | 第58-68页 |
| 1 材料与方法 | 第58-60页 |
| 1.1 材料 | 第58-59页 |
| 1.2 方法 | 第59-60页 |
| 2 实验结果 | 第60-67页 |
| 2.1 GDH基因的克隆 | 第60-61页 |
| 2.2 GDH基因重组表达载体的构建 | 第61页 |
| 2.3 重组GDH的诱导表达和纯化 | 第61-62页 |
| 2.4 GDH活性测定 | 第62页 |
| 2.5 GDH底物特异性及动力学分析 | 第62-63页 |
| 2.6 温度和pH对GDH活性的影响 | 第63-65页 |
| 2.7 金属离子对GDH活性的影响 | 第65页 |
| 2.8 GDH催化的立体催化特性 | 第65-67页 |
| 3 小结与讨论 | 第67-68页 |
| 第四章 基于代谢途径重构合成(3R)-乙偶姻的研究 | 第68-82页 |
| 1 材料与方法 | 第68-72页 |
| 1.1 材料 | 第68-69页 |
| 1.2 方法 | 第69-72页 |
| 2 实验结果 | 第72-80页 |
| 2.1 乙偶姻操纵子AC和NADH氧化酶nox基因的扩增 | 第72页 |
| 2.2 E.coli DH5α/pUC-AC和E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌构建 | 第72-73页 |
| 2.3 E.coli DH5α/pUC-AC和E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌表达情况分析 | 第73-74页 |
| 2.4 coli DH5α/pUC-AC和E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌产乙偶姻分析 | 第74页 |
| 2.5 E.coli DH5α/pUC-AC及E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌产乙偶姻定量分析 | 第74-75页 |
| 2.6 E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌产乙偶姻手性分析 | 第75页 |
| 2.7 E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌发酵条件的优化 | 第75-77页 |
| 2.8 E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌发酵培养基配方正交实验 | 第77-79页 |
| 2.9 E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌分批发酵实验 | 第79-80页 |
| 2.10 E.coli DH5α/pAC-NOX工程菌补料发酵实验 | 第80页 |
| 3 小结与讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 重组meso-BDH全细胞催化双乙酰合成(3S)-乙偶姻 | 第82-88页 |
| 1 材料与方法 | 第82-83页 |
| 1.1 材料 | 第82页 |
| 1.2 方法 | 第82-83页 |
| 2 实验结果 | 第83-87页 |
| 2.1 重组菌全细胞催化合成(3S)-乙偶姻 | 第83-84页 |
| 2.2 催化条件:反应温度与pH对合成(3S)-乙偶姻的影响 | 第84-85页 |
| 2.3 催化体系:菌体湿重、葡萄糖浓度、双乙酰浓度对合成(3S)-乙偶姻的影响 | 第85-86页 |
| 2.4 催化体系正交实验 | 第86页 |
| 2.5 最佳催化体系验证 | 第86-87页 |
| 3 小结与讨论 | 第87-88页 |
| 第六章 总结与展望 | 第88-91页 |
| 1 总结 | 第88-89页 |
| 2 展望 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-98页 |
| 附录 英文缩写 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 硕士期间发表论文 | 第100页 |
