| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第13-35页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 莱氏野村菌概况 | 第13-14页 |
| 1.3 真菌基因敲除方法的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 过氧化物酶体及其生物学研究 | 第16-24页 |
| 1.4.1 丝状真菌过氧化物酶体的生成和降解 | 第16-19页 |
| 1.4.2 过氧化物酶体Peroxins蛋白 | 第19页 |
| 1.4.3 过氧化物酶体PEX16基因的功能与作用 | 第19-24页 |
| 1.5 真菌过氧化氢酶及其生物学功能 | 第24-31页 |
| 1.5.1 过氧化氢酶的结构和分类 | 第24-28页 |
| 1.5.2 过氧化氢酶的功能及作用机理 | 第28-29页 |
| 1.5.3 过氧化氢酶在真菌中的研究进展 | 第29-31页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第31页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第31页 |
| 1.6.2 研究意义 | 第31页 |
| 1.7 研究内容和技术路线 | 第31-32页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第31-32页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第32页 |
| 1.8 本研究的创新之处 | 第32-35页 |
| 2 莱氏野村菌split-marker高效基因敲除体系的建立 | 第35-77页 |
| 2.1 材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第35页 |
| 2.1.2 载体 | 第35页 |
| 2.1.3 常用培养基配方 | 第35-36页 |
| 2.1.4 主要化学试剂和试剂盒 | 第36页 |
| 2.1.5 实验用主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 2.1.6 主要实验溶液配方 | 第37-38页 |
| 2.2 主要实验方法 | 第38-65页 |
| 2.2.1 莱氏野村菌菌株培养及芽生孢子悬浮液的制备 | 第38页 |
| 2.2.2 莱氏野村菌基因组DNA的大量提取和小量提取 | 第38-39页 |
| 2.2.3 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因和左右侧翼序列的克隆 | 第39-44页 |
| 2.2.4 潮霉素split-marker基因敲除载体的构建 | 第44-52页 |
| 2.2.5 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因的split-marker敲除载体和linearcassette敲除载体的构建 | 第52-58页 |
| 2.2.6 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因的敲除 | 第58-59页 |
| 2.2.7 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因敲除转化子的筛选 | 第59-61页 |
| 2.2.8 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因敲除菌株的southernblotting验证 | 第61-65页 |
| 2.3 结果与分析 | 第65-73页 |
| 2.3.1 Split-marker敲除载体的构建 | 第65页 |
| 2.3.2 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因侧翼序列的克隆和敲除载体的构建 | 第65-68页 |
| 2.3.3 农杆菌介导遗传转化的效率 | 第68-69页 |
| 2.3.4 基因敲除突变体的筛选及两种转化方法基因敲除效率的比较 | 第69-71页 |
| 2.3.5 NrCat1,NrCat4和NrPex16基因敲除突变体的southernblotting验证 | 第71-73页 |
| 2.4 讨论 | 第73-77页 |
| 3 莱氏野村菌过氧化氢酶NrCat1和NrCat4基因的功能研究 | 第77-121页 |
| 3.1 材料 | 第77页 |
| 3.1.1 供试菌株与昆虫 | 第77页 |
| 3.1.2 主要培养基配方 | 第77页 |
| 3.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第77页 |
| 3.1.4 实验用主要设备 | 第77页 |
| 3.2 主要实验方法 | 第77-86页 |
| 3.2.1 莱氏野村菌野生型菌株和突变体菌株的培养 | 第77-78页 |
| 3.2.2 莱氏野村菌野生型菌株和突变体菌株分生孢子悬浮液的制备 | 第78页 |
| 3.2.3 莱氏野村菌RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第78-81页 |
| 3.2.4 NrCat1和NrCat4基因的生物信息学分析 | 第81页 |
| 3.2.5 NrCat1和NrCat4基因对不同浓度过氧化氢的应答 | 第81-83页 |
| 3.2.6 NrCat1和NrCat4基因在微菌核形成过程中表达模式分析 | 第83页 |
| 3.2.7 NrCat1和NrCat4基因突变菌株的构建 | 第83页 |
| 3.2.8 菌株微菌核诱导及计数 | 第83页 |
| 3.2.9 菌株对过氧化氢敏感性的测定 | 第83-84页 |
| 3.2.10 孢子萌发率测定 | 第84页 |
| 3.2.11 菌株产孢量测定 | 第84页 |
| 3.2.12 菌丝生长速率的测定 | 第84页 |
| 3.2.13 菌株过氧化氢酶活性测定 | 第84-85页 |
| 3.2.14 ΔNrCat1和ΔNrCat4突变体中其它抗氧化基因的表达测定 | 第85页 |
| 3.2.15 菌株抗逆性的检测 | 第85-86页 |
| 3.2.16 ΔNrCat1和ΔNrCat4突变体菌株对斜纹夜蛾幼虫生物毒力测定 | 第86页 |
| 3.2.17 数据分析 | 第86页 |
| 3.3 结果与分析 | 第86-117页 |
| 3.3.1 NrCat1和NrCat4基因的生物信息学分析 | 第86-95页 |
| 3.3.2 NrCat1和NrCat4基因对不同浓度过氧化氢应答的分析 | 第95-96页 |
| 3.3.3 NrCat1和NrCat4基因在微菌核形成过程中表达模式分析 | 第96-97页 |
| 3.3.4 NrCat1和NrCat4基因在微菌核形成中的作用 | 第97-100页 |
| 3.3.5 NrCat1和NrCat4基因缺失对过氧化氢耐受能力的影响 | 第100-102页 |
| 3.3.6 NrCat1和NrCat4基因缺失对孢子萌发的影响 | 第102-103页 |
| 3.3.7 NrCat1和NrCat4基因缺失对产孢量的影响 | 第103-104页 |
| 3.3.8 NrCat1和NrCat4基因缺失对菌丝生长速率的影响 | 第104页 |
| 3.3.9 NrCat1和NrCat4基因缺失对过氧化氢酶活性的影响 | 第104-105页 |
| 3.3.10 ΔNrCat1和ΔNrCat4突变体中其它抗氧化基因对过氧化氢的应答 | 第105-107页 |
| 3.3.11 突变体菌株微菌核形成过程中其它抗氧化基因的表达分析 | 第107-109页 |
| 3.3.12 NrCat1和NrCat4基因缺失对菌株抗逆性的影响 | 第109-117页 |
| 3.3.13 NrCat1和NrCat4基因缺失对菌株毒力的影响 | 第117页 |
| 3.4 讨论 | 第117-120页 |
| 3.5 本章小结 | 第120-121页 |
| 4 莱氏野村菌过过氧化物酶体膜蛋白NrPex16基因的功能研究 | 第121-139页 |
| 4.1 材料 | 第121页 |
| 4.1.1 供试菌株与昆虫 | 第121页 |
| 4.1.2 主要培养基配方 | 第121页 |
| 4.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第121页 |
| 4.1.4 实验用主要设备 | 第121页 |
| 4.2 主要实验方法 | 第121-122页 |
| 4.2.1 莱氏野村菌野生型菌株和突变体菌株的培养 | 第121页 |
| 4.2.2 莱氏野村菌野生型菌株和突变体菌株分生孢子悬浮液的制备 | 第121页 |
| 4.2.3 莱氏野村菌RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第121页 |
| 4.2.4 NrPex16基因的生物信息学分析 | 第121-122页 |
| 4.2.5 NrPex16基因突变菌株的构建 | 第122页 |
| 4.2.6 菌株对过氧化氢敏感性的测定 | 第122页 |
| 4.2.7 菌株的孢子萌发率测定 | 第122页 |
| 4.2.8 菌株产孢量测定 | 第122页 |
| 4.2.9 菌株菌丝生长速率的测定 | 第122页 |
| 4.2.10 ΔNrPex16突变体菌株中其它抗氧化胁迫基因表达模式分析 | 第122页 |
| 4.2.11 菌株抗逆性的检测 | 第122页 |
| 4.2.12 ΔNrPex16突变体对脂类的代谢能力测定 | 第122页 |
| 4.2.13 ΔNrPex突变体菌株对斜纹夜蛾幼虫生物毒力测定 | 第122页 |
| 4.2.14 数据分析 | 第122页 |
| 4.3 结果与分析 | 第122-137页 |
| 4.3.1 NrPex16基因的生物信息学分析 | 第122-128页 |
| 4.3.2 NrPex16基因缺失对莱氏野村菌生长发育的影响 | 第128页 |
| 4.3.3 NrPex16基因缺失对过氧化氢耐受力的影响 | 第128-129页 |
| 4.3.4 NrPex16基因缺失对孢子萌发率的影响 | 第129-130页 |
| 4.3.5 NrPex16基因缺失对产孢量的影响 | 第130页 |
| 4.3.6 ΔNrPex16突变体中其它抗氧化基因对过氧化氢的应答 | 第130-131页 |
| 4.3.7 NrPex16基因缺失对脂肪酸代谢的影响 | 第131-133页 |
| 4.3.8 NrPex16基因缺失对菌株抗逆性的影响 | 第133-137页 |
| 4.3.9 NrPex16基因缺失对菌株毒力的影响 | 第137页 |
| 4.4 讨论 | 第137-139页 |
| 5 结论与展望 | 第139-141页 |
| 5.1 主要结论 | 第139-140页 |
| 5.2 后续工作建议 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-153页 |
| 附录 | 第153页 |
| A.攻读博士学位期间发表及拟发表的论文目录 | 第153页 |
| B.作者在攻读博士学位期间参加的科研项目 | 第153页 |
