| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 1 绪论 | 第7-16页 |
| 1.1 流体剪切应力与心血管疾病 | 第7-9页 |
| 1.1.1 血管内皮功能受到流体剪切应力调节 | 第7页 |
| 1.1.2 流体剪切应力通过RhoGTPases调节内皮功能 | 第7-9页 |
| 1.2 Rho GDIα与RhoGTPases亲和度调节 | 第9-13页 |
| 1.2.1 蛋白相互作用 | 第10-11页 |
| 1.2.2 转译后修饰 | 第11-13页 |
| 1.2.3 磷脂 | 第13页 |
| 1.3 Rho GDIα与细胞迁移 | 第13-14页 |
| 1.4 荧光共振能量转移技术 | 第14-15页 |
| 1.5 本文的研究目的 | 第15-16页 |
| 2 Rho GDIα磷酸化变体探针的设计与构建 | 第16-25页 |
| 2.1 FRET探针设计原理 | 第16-17页 |
| 2.2 材料 | 第17-19页 |
| 2.2.1 引物 | 第17-18页 |
| 2.2.2 试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.3 仪器 | 第19页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第19页 |
| 2.3 方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.3.2 限制性酶切 | 第21页 |
| 2.3.3 转化 | 第21-22页 |
| 2.3.4 质粒小抽及测序 | 第22页 |
| 2.3.5 细胞培养与转染 | 第22-23页 |
| 2.3.6 FRET显微镜拍摄 | 第23页 |
| 2.4 结果 | 第23-24页 |
| 2.4.1 测序结果 | 第23-24页 |
| 2.4.2 内皮细胞转染荧光验证 | 第24页 |
| 2.5 讨论 | 第24-25页 |
| 3 磷酸化在剪切应力调节Rho GDIα与RhoGTPases亲和度中的作用 | 第25-43页 |
| 3.1 材料和方法 | 第25-32页 |
| 3.1.1 试剂 | 第25页 |
| 3.1.2 仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 细胞力学加载系统 | 第25-26页 |
| 3.1.4 实验设计 | 第26-29页 |
| 3.1.5 图像分析与处理 | 第29-32页 |
| 3.2 实验结果 | 第32-40页 |
| 3.2.1 剪切应力降低Rho GDIα-RhoGTPases亲和度 | 第32-33页 |
| 3.2.2 剪切应力诱导的Rho GDIα-RhoGTPases亲和度极性受到PAK1介导的Rho GDIαSer101/Ser174位点磷酸化调节 | 第33-35页 |
| 3.2.3 Ser101或Ser174位点调节剪切应力诱导的Rho GDIα-RhoGTPases解离及亲和度极性 | 第35-36页 |
| 3.2.4 Y156位点磷酸化调节剪切应力诱导的Rho GDIα-RhoGTPases解离 | 第36-37页 |
| 3.2.5 剪切应力诱导的活化Rac1下游聚集受到Rho GDIα的Ser101/Ser位点调节 | 第37-39页 |
| 3.2.6 剪切应力诱导的活化的Rac1下游聚集受到Rho GDIα的Ser174和Ser101位点调节 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录A 处理PBD-GFP荧光图片的Matlab程序 | 第50-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
