| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 磷酸二酯酶(PDEs) | 第12-16页 |
| 1.1.1 磷酸二酯酶的分类及功能 | 第12-14页 |
| 1.1.2 细菌中的磷酸二酯酶(PDEs) | 第14页 |
| 1.1.3 PDEs水解底物cAMP、cGMP在细菌中的调节 | 第14-16页 |
| 1.1.4 磷酸二酯酶编码基因ymdB | 第16页 |
| 1.2 微生物生物膜 | 第16-19页 |
| 1.2.1 生物膜的简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 生物膜中的组成成分及形成过程 | 第17-18页 |
| 1.2.3 生物膜的形成机制 | 第18-19页 |
| 1.3 立题依据 | 第19-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.1.3 培养基 | 第24页 |
| 2.1.4 所用试剂 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 感受态制备方法 | 第26-28页 |
| 2.2.2 基因缺失菌株的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.3 基因互补菌株的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4 YmdB蛋白表达菌株的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5 YmdB蛋白诱导纯化及酶活测定方法 | 第31-32页 |
| 2.2.6 生物学性状的测定 | 第32-34页 |
| 2.2.7 生物膜形成能力的测定及棉铃虫毒性作用 | 第34-35页 |
| 2.2.8 蛋白免疫印记(Western blot)方法 | 第35页 |
| 2.2.9 RNA的提取、反转录及实时定量PCR方法 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-62页 |
| 3.1 基因缺失菌株及互补菌株构建 | 第36-42页 |
| 3.1.1 ymdB基因缺失菌株构建 | 第36-39页 |
| 3.1.2 ymdB/sinR和ymdB/sinI基因缺失菌株构建 | 第39页 |
| 3.1.3 基因互补菌株构建 | 第39-42页 |
| 3.2 ymdB基因缺失对B.cereus 0-9生理功能的影响 | 第42-48页 |
| 3.2.1 ymdB基因对B.cereus 0-9菌落形态的影响 | 第42页 |
| 3.2.2 ymdB基因对B.cereus 0-9菌落群体生长及盐敏感性的影响 | 第42-44页 |
| 3.2.3 基因缺失对B.cereus 0-9菌株运动能力的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.4 ymdB基因缺失对B.cereus 0-9胞外蛋白酶形成能力的影响 | 第45-47页 |
| 3.2.5 ymdB基因缺失对B.cereus 0-9芽孢形成能力的影响 | 第47页 |
| 3.2.6 ymdB基因缺失对B.cereus 0-9菌株的溶血能力的影响 | 第47-48页 |
| 3.3 ymdB基因编码产物是一种磷酸二酯酶 | 第48-50页 |
| 3.3.1 ymdB基因蛋白表达菌株的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.2 YmdB蛋白的诱导表达及纯化 | 第49页 |
| 3.3.3 YmdB蛋白酶活的测定 | 第49-50页 |
| 3.4 YmdB对B.cereus 0-9的生物膜形成的影响 | 第50-57页 |
| 3.4.1 YmdB参与B.cereus 0-9的生物膜形成 | 第50-52页 |
| 3.4.2 测定YmdB是否通过SinR/SinI调控对生物膜形成的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.3 受SinR调控的基因在B.cereus 0-9、AymdB的表达量 | 第53-54页 |
| 3.4.4 与生物膜形成有关的生物学性状的测定 | 第54-57页 |
| 3.5 测定YmdB蛋白和ymdB基因在B.cereus 0-9中的表达量 | 第57-58页 |
| 3.6 YmdB对参与B.cereus 0-9对棉铃虫毒性的作用 | 第58-62页 |
| 4 结论 | 第62-66页 |
| 5 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
