| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 缩略词简表 | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-14页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 醛酮还原酶AKR1C与疾病 | 第10-12页 |
| 1.3 醛酮还原酶AKR1C与耐药性 | 第12页 |
| 1.4 课题研究的目的与意义 | 第12-14页 |
| 第二章 在转录水平研究AKR1C2的表达差异 | 第14-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-18页 |
| 2.1.1 细胞 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.1.4 实时荧光定量PCR引物 | 第16页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第16-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-23页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第18-19页 |
| 2.2.2 细胞总RNA的提取与鉴定 | 第19-20页 |
| 2.2.3 RNA逆转录成cDNA | 第20-21页 |
| 2.2.4 引物特异性验证 | 第21-22页 |
| 2.2.5 引物扩增效率验证 | 第22-23页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第23页 |
| 2.3 实验结果 | 第23-27页 |
| 2.3.1 RNA质量鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.2 引物特异性验证 | 第24页 |
| 2.3.3 引物扩增效率 | 第24-25页 |
| 2.3.4 利用RealTimePCR检测AKR1C2的mRNA表达水平 | 第25-27页 |
| 2.4 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 在翻译水平研究AKR1C2的表达差异 | 第28-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第28-30页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第30页 |
| 3.1.4 溶液的配置 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 3.2.2 细胞中总蛋白的提取 | 第31-32页 |
| 3.2.3 BCA法测定提取总蛋白的浓度 | 第32页 |
| 3.2.4 利用抗体检测癌细胞株中AKR1C2的表达丰度 | 第32-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-35页 |
| 3.3.1 提取的蛋白浓度 | 第34页 |
| 3.3.2 AKR1C2在蛋白水平的表达丰度 | 第34-35页 |
| 3.4 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 AKR1C2的抑制剂筛选 | 第36-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第36-37页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第37页 |
| 4.1.3 溶液配置 | 第37-39页 |
| 4.2 实验内容 | 第39-45页 |
| 4.2.1 AKR1C2蛋白的表达与纯化 | 第39-44页 |
| 4.2.2 AKR1C2酶活抑制剂筛选模型 | 第44页 |
| 4.2.3 AKR1C2抑制剂的筛选 | 第44-45页 |
| 4.3 实验结果 | 第45-49页 |
| 4.3.1 重组目的蛋白AKR1C2的纯化 | 第45-46页 |
| 4.3.2 AKR1C2酶抑制剂筛选模型体系条件 | 第46-49页 |
| 4.3.3 抑制剂筛选 | 第49页 |
| 4.4 小结 | 第49-50页 |
| 第五章 AKR1C2抑制剂的应用 | 第50-62页 |
| 5.1 实验材料 | 第50-54页 |
| 5.1.1 实验细胞 | 第50页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第50-52页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 5.1.4 溶液的配置 | 第52-54页 |
| 5.2 实验内容 | 第54-55页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第54页 |
| 5.2.2 测定HepG2/DDP细胞耐药指数 | 第54-55页 |
| 5.2.3 HepG2/DDP细胞中AKR1C2的表达丰度 | 第55页 |
| 5.2.4 AKR1C2抑制剂的体外安全浓度 | 第55页 |
| 5.2.5 AKR1C2抑制剂对HepG2/DDP耐药性的逆转作用 | 第55页 |
| 5.3 实验结果 | 第55-61页 |
| 5.3.1 HepG2/DDP细胞耐药指数 | 第55-56页 |
| 5.3.2 AKR1C2的表达丰度 | 第56-57页 |
| 5.3.3 AKR1C2酶活抑制剂体外安全浓度 | 第57-60页 |
| 5.3.4 AKR1C2抑制剂对HepG2/DDP耐药的逆转 | 第60-61页 |
| 5.3.5 AKR1C2抑制剂影响HepG2细胞生长 | 第61页 |
| 5.4 小结 | 第61-62页 |
| 第六章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 6.1 结论 | 第62页 |
| 6.2 展望 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
