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植物磷元素感应蛋白SPX1与PHR蛋白复合物的结晶研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第一章 绪论第17-29页
    1.1 植物体内磷元素含量的调节第17-21页
        1.1.1 SPX1和PHR:植物体内InsP6感知结构域第17-18页
        1.1.2 本课题研究现状第18-21页
        1.1.3 本课题研究意义第21页
    1.2 蛋白质表达与纯化原理第21-24页
        1.2.1 亲和层析第21-24页
            1.2.1.1 亲和层析原理第22页
            1.2.1.2 亲和层析标签第22-23页
            1.2.1.3 亲和层析柱的处理第23-24页
        1.2.2 凝胶过滤层析第24页
    1.3 蛋白晶体学第24-29页
        1.3.1 蛋白晶体生长的原理第25-26页
        1.3.2 X射线晶体学第26页
        1.3.3 同步辐射光源第26-29页
第二章 SPX1和PHR1,PHR2重组质粒的构建第29-41页
    2.1 引言第29页
    2.2 实验材料及仪器第29-32页
        2.2.1 实验仪器第29-30页
        2.2.2 载体质粒和感受态菌株第30-31页
        2.2.3 主要试剂第31页
        2.2.4 培养基第31-32页
        2.2.5 所需buffer及成分第32页
    2.3 构建克隆第32-39页
        2.3.1 聚合酶链式反应(PCR)扩增AtPHR2,OsPHR2及OsSPX1基因第32-35页
        2.3.2 目的基因和载体的双酶切第35-36页
            2.3.2.1 提取载体质粒第35页
            2.3.2.2 片段及载体双酶切第35-36页
        2.3.3 连接第36-37页
        2.3.4 转化第37页
        2.3.5 重组质粒pET-28a AtPHR1,pET-28a OsPHR2,pET-28a OsSPX1鉴定第37-39页
    2.4 实验结果及小结第39-41页
第三章 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2的表达纯化第41-57页
    3.1 引言第41页
    3.2 实验材料及仪器第41-44页
        3.2.1 实验仪器第41-42页
        3.2.2 菌株第42页
        3.2.3 所需试剂第42-44页
    3.3 蛋白试表达第44-49页
        3.3.1 蛋白小量试表达第44-45页
        3.3.2 蛋白表达及初步纯化第45-49页
    3.4 实验结果第49-55页
        3.4.1 AtPHR1纯化结果第49-52页
        3.4.2 OsSPX1纯化结果第52-53页
        3.4.3 OsPHR2纯化结果第53-55页
    3.5 小结第55-57页
第四章 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2大量纯化及孵育结合第57-71页
    4.1 引言第57页
    4.2 实验材料及仪器第57页
    4.3 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2大量纯化第57-66页
        4.3.1 AtPHR1的纯化第57-61页
        4.3.2 OsSPX1的纯化第61-63页
        4.3.3 OsPHR2的纯化第63-66页
    4.4 AtPHR1,OsSPX1复合物的获得第66-68页
        4.4.1. AtPHR1,OsSPX1单独纯化第66页
        4.4.2. AtPHR1,OsSPX1孵育结合第66-68页
    4.5 OsPHR2, OsSPX1复合物的获得第68-70页
        4.5.1 OsPHR2, OsSPX1单独纯化第68页
        4.5.2 OsPHR2, OsSPX1孵育结合第68-70页
    4.6 小结第70-71页
第五章 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2及其复合物的结晶与数据收集第71-85页
    5.1 引言第71页
    5.2 实验材料及仪器第71-72页
        5.2.1 实验材料第71页
        5.2.2 实验仪器第71-72页
    5.3 晶体初筛第72-73页
    5.4 晶体优化第73-75页
        5.4.1 筛pH第74-75页
        5.4.2 筛沉淀剂浓度第75页
        5.4.3 筛additive和salt第75页
    5.5 硒代蛋白及晶体的获得第75-76页
    5.6 晶体X射线衍射第76-77页
    5.7 结晶实验结果第77-83页
        5.7.1 AtPHR1的晶体筛选与优化第77-79页
        5.7.2 AtPHR1的晶体衍射数据收集与处理第79-81页
        5.7.3 AtPHR1/OsSPX1的晶体筛选与优化第81-83页
        5.7.4 其他三个蛋白/蛋白复合物的晶体筛选第83页
    5.8 小结第83-85页
第六章 结果与讨论第85-87页
    6.1 实验结果总结第85页
    6.2 建议与讨论第85-87页
参考文献第87-91页
附录1第91-92页
附录2第92-93页
附录3第93-95页
致谢第95-97页
研究成果及发表的学术论文第97-99页
作者与导师简介第99-101页
附件第101-102页

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