| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 植物体内磷元素含量的调节 | 第17-21页 |
| 1.1.1 SPX1和PHR:植物体内InsP6感知结构域 | 第17-18页 |
| 1.1.2 本课题研究现状 | 第18-21页 |
| 1.1.3 本课题研究意义 | 第21页 |
| 1.2 蛋白质表达与纯化原理 | 第21-24页 |
| 1.2.1 亲和层析 | 第21-24页 |
| 1.2.1.1 亲和层析原理 | 第22页 |
| 1.2.1.2 亲和层析标签 | 第22-23页 |
| 1.2.1.3 亲和层析柱的处理 | 第23-24页 |
| 1.2.2 凝胶过滤层析 | 第24页 |
| 1.3 蛋白晶体学 | 第24-29页 |
| 1.3.1 蛋白晶体生长的原理 | 第25-26页 |
| 1.3.2 X射线晶体学 | 第26页 |
| 1.3.3 同步辐射光源 | 第26-29页 |
| 第二章 SPX1和PHR1,PHR2重组质粒的构建 | 第29-41页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第29-32页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.2 载体质粒和感受态菌株 | 第30-31页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第31页 |
| 2.2.4 培养基 | 第31-32页 |
| 2.2.5 所需buffer及成分 | 第32页 |
| 2.3 构建克隆 | 第32-39页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应(PCR)扩增AtPHR2,OsPHR2及OsSPX1基因 | 第32-35页 |
| 2.3.2 目的基因和载体的双酶切 | 第35-36页 |
| 2.3.2.1 提取载体质粒 | 第35页 |
| 2.3.2.2 片段及载体双酶切 | 第35-36页 |
| 2.3.3 连接 | 第36-37页 |
| 2.3.4 转化 | 第37页 |
| 2.3.5 重组质粒pET-28a AtPHR1,pET-28a OsPHR2,pET-28a OsSPX1鉴定 | 第37-39页 |
| 2.4 实验结果及小结 | 第39-41页 |
| 第三章 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2的表达纯化 | 第41-57页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第41-44页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.2 菌株 | 第42页 |
| 3.2.3 所需试剂 | 第42-44页 |
| 3.3 蛋白试表达 | 第44-49页 |
| 3.3.1 蛋白小量试表达 | 第44-45页 |
| 3.3.2 蛋白表达及初步纯化 | 第45-49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-55页 |
| 3.4.1 AtPHR1纯化结果 | 第49-52页 |
| 3.4.2 OsSPX1纯化结果 | 第52-53页 |
| 3.4.3 OsPHR2纯化结果 | 第53-55页 |
| 3.5 小结 | 第55-57页 |
| 第四章 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2大量纯化及孵育结合 | 第57-71页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第57页 |
| 4.3 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2大量纯化 | 第57-66页 |
| 4.3.1 AtPHR1的纯化 | 第57-61页 |
| 4.3.2 OsSPX1的纯化 | 第61-63页 |
| 4.3.3 OsPHR2的纯化 | 第63-66页 |
| 4.4 AtPHR1,OsSPX1复合物的获得 | 第66-68页 |
| 4.4.1. AtPHR1,OsSPX1单独纯化 | 第66页 |
| 4.4.2. AtPHR1,OsSPX1孵育结合 | 第66-68页 |
| 4.5 OsPHR2, OsSPX1复合物的获得 | 第68-70页 |
| 4.5.1 OsPHR2, OsSPX1单独纯化 | 第68页 |
| 4.5.2 OsPHR2, OsSPX1孵育结合 | 第68-70页 |
| 4.6 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 AtPHR1,OsSPX1,OsPHR2及其复合物的结晶与数据收集 | 第71-85页 |
| 5.1 引言 | 第71页 |
| 5.2 实验材料及仪器 | 第71-72页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第71页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第71-72页 |
| 5.3 晶体初筛 | 第72-73页 |
| 5.4 晶体优化 | 第73-75页 |
| 5.4.1 筛pH | 第74-75页 |
| 5.4.2 筛沉淀剂浓度 | 第75页 |
| 5.4.3 筛additive和salt | 第75页 |
| 5.5 硒代蛋白及晶体的获得 | 第75-76页 |
| 5.6 晶体X射线衍射 | 第76-77页 |
| 5.7 结晶实验结果 | 第77-83页 |
| 5.7.1 AtPHR1的晶体筛选与优化 | 第77-79页 |
| 5.7.2 AtPHR1的晶体衍射数据收集与处理 | 第79-81页 |
| 5.7.3 AtPHR1/OsSPX1的晶体筛选与优化 | 第81-83页 |
| 5.7.4 其他三个蛋白/蛋白复合物的晶体筛选 | 第83页 |
| 5.8 小结 | 第83-85页 |
| 第六章 结果与讨论 | 第85-87页 |
| 6.1 实验结果总结 | 第85页 |
| 6.2 建议与讨论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 附录1 | 第91-92页 |
| 附录2 | 第92-93页 |
| 附录3 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第97-99页 |
| 作者与导师简介 | 第99-101页 |
| 附件 | 第101-102页 |
