| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号与缩略词说明 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-27页 |
| 1.1 有机磷农药概述 | 第17-18页 |
| 1.1.1 有机磷农药的污染及危害 | 第17页 |
| 1.1.2 有机磷农药残留的检测方法 | 第17-18页 |
| 1.2 适配体的概述 | 第18-21页 |
| 1.2.1 适配体的概述 | 第18-19页 |
| 1.2.2 适配体的优势 | 第19页 |
| 1.2.3 适配体的应用 | 第19-21页 |
| 1.2.3.1 食品安全检测的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 医药领域的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.3.3 其他应用 | 第21页 |
| 1.3 SELEX技术 | 第21-25页 |
| 1.3.1 SELEX的原理 | 第21页 |
| 1.3.2 SELEX的过程 | 第21-22页 |
| 1.3.3 SELEX的分类 | 第22-25页 |
| 1.3.3.1 磁珠-SELEX(Magnetic beads-SELEX) | 第22-23页 |
| 1.3.3.2 毛细管电泳-SELEX(Capillary electrophoresis-SELEX, CE-LELEX) | 第23页 |
| 1.3.3.3 细胞-SELEX (Cell-SELEX) | 第23页 |
| 1.3.3.4 计算机模拟-SELEX(In silico selection) | 第23-24页 |
| 1.3.3.5 自动-SELEX(Automated SELEX) | 第24页 |
| 1.3.3.6 无引物-SELEX(Minimal primer and primer-free SELEX) | 第24-25页 |
| 1.4 有机磷农药适配体筛选现状 | 第25页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第25页 |
| 1.6 本课题研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 1.7 本课题的创新点 | 第26-27页 |
| 第二章 有机磷农药靶标的选择 | 第27-41页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与实验仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要缓冲液的配制 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 有机磷农药的偶联 | 第29-30页 |
| 2.3.1.1 OP3-BSA的制备 | 第29页 |
| 2.3.1.2 OP3-OVA的制备 | 第29-30页 |
| 2.3.1.3 OP4-BSA的制备 | 第30页 |
| 2.3.1.4 OP4-OVA的制备 | 第30页 |
| 2.3.2 有机磷农药偶联物的纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.3 有机磷农药偶联产物的表征 | 第31-32页 |
| 2.3.3.1 紫外光谱法 | 第31页 |
| 2.3.3.2 生物质谱法 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-39页 |
| 2.4.1 偶联产物的紫外光谱表征 | 第32-35页 |
| 2.4.1.1 OP3-BSA的紫外光谱表征 | 第32-33页 |
| 2.4.1.2 OP3-OVA的紫外光谱表征 | 第33页 |
| 2.4.1.3 OP4-BSA的紫外光谱表征 | 第33-34页 |
| 2.4.1.4 OP4-OVA的紫外光谱表征 | 第34-35页 |
| 2.4.2 偶联产物的生物质谱表征 | 第35-39页 |
| 2.4.2.1 OP3-BSA的生物质谱表征 | 第35-36页 |
| 2.4.2.2 OP3-OVA的生物质谱表征 | 第36-37页 |
| 2.4.2.3 OP4-BSA的生物质谱表征 | 第37-38页 |
| 2.4.2.4 OP4-OVA的生物质谱表征 | 第38页 |
| 2.4.2.5 四种偶联产物偶联比汇总 | 第38-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-41页 |
| 第三章 有机磷农药OP3的适配体筛选 | 第41-61页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料与实验仪器 | 第41-43页 |
| 3.2.1 初级文库及引物 | 第41页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.4 主要缓冲液的配制 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-49页 |
| 3.3.1 OP3-BSA与氨基磁珠的偶联 | 第43-44页 |
| 3.3.2 BSA与氨基磁珠的偶联 | 第44-45页 |
| 3.3.3 OP3-BSA、BSA与氨基磁珠偶联的表征 | 第45页 |
| 3.3.3.1 OP3-BSA与氨基磁珠偶联的表征 | 第45页 |
| 3.3.3.2 BSA与氨基磁珠偶联的表征 | 第45页 |
| 3.3.4 电泳条件的优化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 PCR退火温度的优化 | 第46-47页 |
| 3.3.6 磁珠-SELEX筛选 | 第47-49页 |
| 3.3.7 最优测序轮数的确定 | 第49页 |
| 3.3.8 高通量测序及二级结构模拟 | 第49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-59页 |
| 3.4.1 OP3-BSA与氨基磁珠的偶联 | 第49-50页 |
| 3.4.2 载体蛋白BSA与氨基磁珠的偶联 | 第50页 |
| 3.4.3 磁珠-SELEX筛选 | 第50-59页 |
| 3.4.3.1 电泳条件优化 | 第50-51页 |
| 3.4.3.2 PCR退火温度的优化 | 第51-52页 |
| 3.4.3.3 筛选过程的监测 | 第52-54页 |
| 3.4.3.4 高通量测序和二级结构预测 | 第54-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-61页 |
| 第四章 核酸适配体性质的考察 | 第61-73页 |
| 4.1 前言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第61-63页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第61-63页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-65页 |
| 4.3.1 适配体亲和性的表征 | 第63页 |
| 4.3.2 适配体与靶标OP3结合的解离常数测定 | 第63-64页 |
| 4.3.3 适配体对七种有机磷农药结合能力的评价 | 第64-65页 |
| 4.3.3.1 有机磷农药反应浓度的确定 | 第64-65页 |
| 4.3.3.2 适配体对七种有机磷农药结合能力的评价 | 第65页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第65-72页 |
| 4.4.1 适配体亲和性的初步表征 | 第65-66页 |
| 4.4.2 适配体与靶标OP3结合的解离常数测定 | 第66-68页 |
| 4.4.3 适配体对七种有机磷农药结合能力的评价 | 第68-72页 |
| 4.4.3.1 有机磷农药反应浓度的确定 | 第68-69页 |
| 4.4.3.2 适配体对七种有机磷农药结合能力的评价 | 第69-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 第五章 总结与展望 | 第73-75页 |
| 5.1 总结 | 第73-74页 |
| 5.2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第83-85页 |
| 作者和导师简介 | 第85-87页 |
| 附表 | 第87-89页 |
