| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 番茄果实成熟与乙烯调控 | 第11-16页 |
| 1.1.1 乙烯的生物合成途径 | 第12-15页 |
| 1.1.2 乙烯的信号响应和转导 | 第15-16页 |
| 1.2 番茄果实成熟相关的转录因子 | 第16-20页 |
| 1.3 MADS-BOX转录因子研究进展 | 第20-25页 |
| 1.3.1 MADS-box蛋白的分类及结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 MADS-box基因的生物学功能研究 | 第21-23页 |
| 1.3.3 MADS-box转录因子的相互作用 | 第23-25页 |
| 2 引言 | 第25-27页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第25页 |
| 2.2 研究的方法内容及技术路线 | 第25-26页 |
| 2.2.1 研究的方法内容 | 第25-26页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第26页 |
| 2.3 研究的创新点 | 第26-27页 |
| 3 番茄SOC-like4(SlSL4)基因的克隆及蛋白结构分析 | 第27-41页 |
| 3.1 实验材料、试剂、培养基和设备 | 第27-28页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第27页 |
| 3.1.2 试剂与培养基 | 第27-28页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 3.2.1 番茄果实总RNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.2.2 cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 3.2.3 SlSL4基因的PCR扩增及纯化 | 第30-31页 |
| 3.2.4 SlSL4基因连接pEASY-Blunt载体 | 第31-32页 |
| 3.2.5 PCR方法鉴定阳性克隆 | 第32页 |
| 3.2.6 阳性重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| 3.2.7 SlSL4蛋白的一级结构分析 | 第33页 |
| 3.2.8 SlSL4蛋白的二级结构、理化性质及亚细胞定位 | 第33页 |
| 3.2.9 SlSL4蛋白与其他MADS-box蛋白同源比对及系统发育树分析 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-40页 |
| 3.3.1 SlSL4基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3.3.2 pEASY-Blunt载体与SlSL4基因重组子的验证 | 第34-35页 |
| 3.3.3 SlSL4蛋白的一级结构 | 第35-37页 |
| 3.3.4 SlSL4蛋白的二级结构、理化性质及亚细胞定位 | 第37-38页 |
| 3.3.5 SlSL4蛋白与其他MADS-box蛋白同源比对及系统发育树分析 | 第38-40页 |
| 3.4 小结 | 第40-41页 |
| 4 番茄SlSL4基因表达模式分析 | 第41-49页 |
| 4.1 材料、试剂及设备 | 第41页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 实验设备 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 番茄样品的收集 | 第41-42页 |
| 4.2.2 总RNA提取及反转录成cDNA | 第42页 |
| 4.2.3 SlSL4基因荧光定量引物的设计与筛选 | 第42-43页 |
| 4.2.4 SlSL4基因表达模式分析 | 第43-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.3.1 SlSL4基因的qRT-PCR扩增条件 | 第44页 |
| 4.3.2 SlSL4基因在番茄果实成熟突变体中的表达模式 | 第44-45页 |
| 4.3.3 激素处理对SlSL4基因表达的影响 | 第45-47页 |
| 4.4 小结 | 第47-49页 |
| 5 番茄SlSL4基因超表达载体和RNAi沉默载体的构建与番茄的遗传转化 | 第49-71页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第49-53页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第49页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第49-52页 |
| 5.1.3 培养基 | 第52-53页 |
| 5.2 实验设备和仪器 | 第53页 |
| 5.3 实验方法 | 第53-64页 |
| 5.3.1 SlSL4基因超表达载体的构建 | 第53-56页 |
| 5.3.2 pHANNIBAL-SlSL4i载体的构建 | 第56-59页 |
| 5.3.3 pVCT2020-SlSL4i载体的构建 | 第59-60页 |
| 5.3.4 SlSL4基因超表达和RNAi沉默载体转化农杆菌 | 第60-62页 |
| 5.3.5 番茄遗传转化 | 第62-63页 |
| 5.3.6 培育转基因番茄 | 第63页 |
| 5.3.7 转基因番茄阳性株系筛选 | 第63-64页 |
| 5.3.8 超表达及沉默株系的实时荧光定量筛选 | 第64页 |
| 5.4 结果与分析 | 第64-70页 |
| 5.4.1 SlSL4基因超表达片段克隆 | 第64-65页 |
| 5.4.2 pVCT2024-SlSL4超表达载体的验证 | 第65页 |
| 5.4.3 SlSL4基因RNAi沉默片段克隆 | 第65-66页 |
| 5.4.4 pHANNIBAL-SlSL4i载体的验证 | 第66-67页 |
| 5.4.5 pVCT2020-SlSL4i载体的验证 | 第67-68页 |
| 5.4.6 转基因番茄植株的培育 | 第68页 |
| 5.4.7 转基因番茄阳性植株的筛选 | 第68-69页 |
| 5.4.8 SlSL4基因在转基因番茄中表达量的检测 | 第69-70页 |
| 5.5 小结 | 第70-71页 |
| 6 番茄SlSL4基因在番茄果实成熟过程中的功能分析 | 第71-85页 |
| 6.1 实验材料、试剂和培养基 | 第71-72页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 6.1.2 试剂和培养基 | 第72页 |
| 6.2 实验方法 | 第72-79页 |
| 6.2.1 SlSL4基因转基因番茄果实成熟表型观察 | 第73页 |
| 6.2.2 SlSL4基因超表达转基因番茄果实乙烯合成相关基因检测 | 第73-74页 |
| 6.2.3 SlSL4基因超表达转基因番茄果实乙烯响应基因检测 | 第74页 |
| 6.2.4 SlSL4基因超表达转基因番茄果实其他果实成熟相关基因检测 | 第74-75页 |
| 6.2.5 SlSL4与番茄MADS-box家族成熟相关蛋白相互作用分析 | 第75-79页 |
| 6.3 结果与分析 | 第79-84页 |
| 6.3.1 SlSL4基因超表达和RNAi沉默转基因番茄表型观察 | 第79-80页 |
| 6.3.2 SlSL4基因超表达转基因番茄果实中乙烯合成相关基因的检测 | 第80-81页 |
| 6.3.3 SlSL4基因超表达转基因番茄果实中乙烯响应基因的检测 | 第81-82页 |
| 6.3.4 SlSL4基因超表达转基因番茄果实中其他果实成熟相关基因的检测 | 第82-83页 |
| 6.3.5 SlSL4与番茄MADS-box家族成熟相关蛋白相互作用分析 | 第83-84页 |
| 6.4 小结 | 第84-85页 |
| 7 讨论与展望 | 第85-89页 |
| 7.1 讨论 | 第85-86页 |
| 7.2 结论 | 第86-87页 |
| 7.3 展望 | 第87-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 附录 | 第101-103页 |
| 附录1 缩略词表 | 第101-103页 |
| 附录2 其他研究成果 | 第103页 |
