| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| 1.1 植物类黄酮概述 | 第13-24页 |
| 1.1.1 类黄酮化学结构与分类 | 第13页 |
| 1.1.2 类黄酮代谢路径 | 第13-17页 |
| 1.1.3 类黄酮合成调控 | 第17-21页 |
| 1.1.4 类黄酮的生理功能 | 第21-24页 |
| 1.2 异黄酮及缩合单宁转基因育种进展 | 第24-27页 |
| 1.2.1 异黄酮转基因育种进展 | 第24-26页 |
| 1.2.2 缩合单宁转基因育种进展 | 第26-27页 |
| 1.3 类黄酮转运机制研究进展 | 第27-31页 |
| 1.3.1 囊泡介导的类黄酮运输 | 第27-28页 |
| 1.3.2 转运蛋白介导的类黄酮运输 | 第28-31页 |
| 1.4 光亲和标记技术及其在植物研究中的应用 | 第31-33页 |
| 1.4.1 光亲和探针基本结构 | 第31-32页 |
| 1.4.2 光亲和标记技术在植物研究中的应用 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-52页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第34页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒和化学药品 | 第34-35页 |
| 2.2 实验常用溶液及试剂配制 | 第35-36页 |
| 2.2.1 常用溶液 | 第35页 |
| 2.2.2 常用培养基 | 第35-36页 |
| 2.3 实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.4 实验方法 | 第37-52页 |
| 2.4.1 分子克隆与载体构建 | 第37-43页 |
| 2.4.2 截形苜蓿稳定遗传转化(叶盘转化法) | 第43-44页 |
| 2.4.3 植物材料分子鉴定 | 第44-46页 |
| 2.4.4 HPLC分析类黄酮 | 第46-47页 |
| 2.4.5 定量测定缩合单宁含量 | 第47-48页 |
| 2.4.6 光亲和标记反应 | 第48-51页 |
| 2.4.7 实验中用到的引物序列 | 第51-52页 |
| 第三章 多基因聚合育种创制高异黄酮高缩合单宁苜蓿新种质 | 第52-77页 |
| 3.1 构建多基因转化载体 | 第53-56页 |
| 3.1.1 构建GmIFS1、GmCHS7、GmCHI1A过表达中间载体 | 第53页 |
| 3.1.2 构建MtF3Hi过表达RNA干扰中间载体 | 第53-55页 |
| 3.1.3 多个表达盒的组装 | 第55-56页 |
| 3.2 获得稳定遗传的转基因株系 | 第56-60页 |
| 3.2.1 农杆菌介导的截形苜蓿遗传转化 | 第56-57页 |
| 3.2.2 PCR筛选T_0代转基因植株 | 第57-58页 |
| 3.2.3 qRT-PCR筛选外源基因高表达及MtF3H表达下调的株系 | 第58-60页 |
| 3.2.4 T_2代转基因株系生长情况 | 第60页 |
| 3.3 苜蓿T_3代转基因株系的Western blotting鉴定 | 第60-63页 |
| 3.3.1 原核表达His-GmCHI1A、His-GmCHS7重组蛋白 | 第60-61页 |
| 3.3.2 多克隆抗体制备及检测 | 第61-62页 |
| 3.3.3 Western blotting检测T3代植株外源蛋白积累情况 | 第62-63页 |
| 3.4 HPLC定性分析转基因株系中的类黄酮 | 第63-66页 |
| 3.4.1 叶片总类黄酮的提取与HPLC分离 | 第63-65页 |
| 3.4.2 LC-UVS定性鉴定异黄酮及黄酮 | 第65-66页 |
| 3.4.3 LC-ESI-MS定性鉴定异黄酮及黄酮 | 第66页 |
| 3.5 HPLC定量分析异黄酮和黄酮含量 | 第66-73页 |
| 3.5.1 HPLC定量分析异黄酮含量 | 第67-72页 |
| 3.5.2 HPLC定量分析黄酮含量 | 第72-73页 |
| 3.6 筛选异黄酮和缩合单宁含量显著提高的转基因优异株系 | 第73-75页 |
| 3.7 讨论与展望 | 第75-77页 |
| 3.7.1 IFS是影响异黄酮积累的关键酶 | 第75页 |
| 3.7.2 异黄酮和黄酮合成在转基因株系中建立新的平衡 | 第75-76页 |
| 3.7.3 GmCHS7、GmCHI1与GmIFS1的协同作用 | 第76页 |
| 3.7.4 展望 | 第76-77页 |
| 第四章 异黄酮转运蛋白筛选鉴定 | 第77-94页 |
| 4.1 基于异黄酮结构的光亲和标记探针设计 | 第77-78页 |
| 4.2 化学合成分子探针 | 第78-82页 |
| 4.2.1 连接部位的合成 | 第78页 |
| 4.2.2 光亲和基团的连接 | 第78-79页 |
| 4.2.3 大豆苷元与连接部位反应 | 第79-81页 |
| 4.2.4 生物素与光亲和衍生物连接 | 第81页 |
| 4.2.5 大分子的连接 | 第81-82页 |
| 4.3 验证探针PADA的光亲和标记能力 | 第82-86页 |
| 4.3.1 探针PADA互作蛋白的选取 | 第82页 |
| 4.3.2 原核表达、纯化类黄酮糖基转移酶UGT78G1 | 第82-83页 |
| 4.3.3 探针PADA与His-UGT78G1互作检测 | 第83-85页 |
| 4.3.4 探针PADA与His-GmCHI1A、His-MtF3H互作检测 | 第85-86页 |
| 4.4 利用生物素抗体免疫沉淀PADA标记的His-UGT78G1 | 第86-87页 |
| 4.5 利用探针PADA富集大豆异黄酮结合蛋白 | 第87-88页 |
| 4.6 高分辨质谱鉴定免疫沉淀的蛋白 | 第88-91页 |
| 4.7 讨论与展望 | 第91-94页 |
| 4.7.1 光亲和标记技术鉴别未知靶蛋白 | 第91页 |
| 4.7.2 探针PADA是有活性的异黄酮衍生物 | 第91-92页 |
| 4.7.3 探针PADA在异黄酮转运机制研究中潜在的应用价值 | 第92-93页 |
| 4.7.4 展望 | 第93-94页 |
| 第五章 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附录 | 第113-115页 |
| 个人简介 | 第115页 |
