| 缩略词 | 第3-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-36页 |
| 1.1 威胁人类健康的致病菌-曲霉菌 | 第14-17页 |
| 1.1.1 真菌感染现状概述 | 第14-15页 |
| 1.1.2 曲霉病概述 | 第15-16页 |
| 1.1.3 曲霉病的诊断 | 第16-17页 |
| 1.2 临床抗真菌药物概述 | 第17-20页 |
| 1.2.1 多烯类药物 | 第18-19页 |
| 1.2.2 唑类药物 | 第19页 |
| 1.2.3 棘白菌素类药物 | 第19-20页 |
| 1.3 抗真菌药物的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 抗真菌药物耐药性的产生 | 第20-21页 |
| 1.3.2 抗真菌药物的研发现状 | 第21-23页 |
| 1.4 药物靶点的筛选 | 第23-24页 |
| 1.5 基于分子片段的药物筛选技术 | 第24-25页 |
| 1.6 药物靶点的鉴定:结合遗传和化学手段 | 第25-27页 |
| 1.7 真菌细胞壁组分前体合成途径作为药物靶点的研究 | 第27-29页 |
| 1.8 真菌细胞膜组分麦角固醇合成通路作为药物靶点的研究 | 第29-30页 |
| 1.9 真菌钙信号通路作为药物靶点的研究 | 第30-33页 |
| 1.10 本文的研究内容和思路 | 第33-36页 |
| 1.10.1 研究内容 | 第33-34页 |
| 1.10.2 研究思路 | 第34-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-64页 |
| 2.1 菌株及培养条件 | 第36-40页 |
| 2.2 曲霉基因组DNA提取 | 第40-41页 |
| 2.3 曲霉突变体的构建 | 第41-51页 |
| 2.3.1 曲霉原生质体的制备与转化 | 第41-42页 |
| 2.3.2 构巢曲霉akrA基因敲除菌株的构建 | 第42-43页 |
| 2.3.3 alcA(p)GFP-akrA酒精启动子条件菌株的构建 | 第43-44页 |
| 2.3.4 AkrA回补菌株、C端DHHC结构域敲除及点突变菌株构建 | 第44-46页 |
| 2.3.5 AkrA与CnaA、CchA、MidA、PmrA等钙信号系统成员的双敲菌株构建 | 第46-47页 |
| 2.3.6 高尔基体RFP标签菌株的构建 | 第47页 |
| 2.3.7 表达水母发光蛋白Aequorin菌株的构建 | 第47-48页 |
| 2.3.8 烟曲霉pmmA及erg10A酒精启动子菌株的构建 | 第48-50页 |
| 2.3.9 烟曲霉Erg10A C端GFP菌株的构建 | 第50-51页 |
| 2.4 突变株表型分析 | 第51-53页 |
| 2.4.1 菌丝生长及产孢 | 第51页 |
| 2.4.2 孢子萌发率 | 第51页 |
| 2.4.3 细胞壁破坏试剂敏感性 | 第51-52页 |
| 2.4.4 E-test与唑类药物敏感性检测 | 第52页 |
| 2.4.5 细胞壁组分测定 | 第52页 |
| 2.4.6 生物膜定量检测 | 第52页 |
| 2.4.7 胞内ROS定量 | 第52-53页 |
| 2.5 Western blotting | 第53页 |
| 2.6 Real-time qPCR | 第53-54页 |
| 2.7 荧光显微镜观察 | 第54页 |
| 2.8 酵母双杂交 | 第54-55页 |
| 2.9 胞内钙离子浓度测定 | 第55页 |
| 2.10 酰基生物素交换法(ABE) | 第55-56页 |
| 2.11 液相色谱串联质谱(LS-MS/MS) | 第56-57页 |
| 2.12 蛋白的表达与纯化 | 第57-59页 |
| 2.12.1 烟曲霉PmmA的表达载体构建及蛋白纯化 | 第57-58页 |
| 2.12.2 烟曲霉Erg10A表达载体构建及蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 2.13 PmmA和Erg10A蛋白的酶活检测 | 第59-60页 |
| 2.14 蛋白的结构解析 | 第60-61页 |
| 2.14.1 蛋白晶体的生长与优化 | 第60页 |
| 2.14.2 晶体衍射数据的收集和处理 | 第60-61页 |
| 2.15 利用生物薄膜干涉技术(Biolayer interferometry,BLI)进行片段分子筛选 | 第61-62页 |
| 2.16 蛋白生物素化标记 | 第62-64页 |
| 第三章 烟曲霉磷酸甘露糖变位酶PmmA作为潜在抗真菌药物靶点的研究 | 第64-96页 |
| 3.1 遗传学验证 | 第66-75页 |
| 3.1.1 pmmA的鉴定和酒精启动子条件菌株的构建 | 第66-67页 |
| 3.1.2 pmmA对烟曲霉生长发育的影响 | 第67-71页 |
| 3.1.3 pmmA对细胞壁破坏试剂敏感性影响的研究 | 第71-72页 |
| 3.1.4 pmmA对细胞壁组分影响的研究 | 第72-74页 |
| 3.1.5 pmmA对生物膜形成影响的研究 | 第74-75页 |
| 3.2 生化及结构生物学验证 | 第75-95页 |
| 3.2.1 PmmA蛋白的酶活动力学检测 | 第75-79页 |
| 3.2.2 PmmA蛋白的结构解析 | 第79-85页 |
| 3.2.3 利用小分子片段库筛选与PmmA蛋白结合的化合物 | 第85-95页 |
| 3.3 本章小结 | 第95-96页 |
| 第四章 烟曲霉乙酰辅酶A酰基转移酶Erg10A作为潜在抗真菌药物靶点的研究 | 第96-127页 |
| 4.1 遗传学验证 | 第98-107页 |
| 4.1.1 erg10A的鉴定及酒精启动子条件菌株的构建 | 第98-99页 |
| 4.1.2 erg10A对菌丝生长影响的研究 | 第99-102页 |
| 4.1.3 Erg10A蛋白的定位 | 第102-103页 |
| 4.1.4 erg10A对细胞壁破坏试剂敏感性影响的研究 | 第103-104页 |
| 4.1.5 erg10A对细胞壁组分影响的研究 | 第104-106页 |
| 4.1.6 erg10A对氧化应激敏感性影响的研究 | 第106-107页 |
| 4.2 生化及结构生物学验证 | 第107-126页 |
| 4.2.1 Erg10A蛋白的酶活动力学检测 | 第107-111页 |
| 4.2.2 Erg10A蛋白的结构解析 | 第111-118页 |
| 4.2.3 利用小分子片段库筛选与Erg10A蛋白结合的化合物 | 第118-126页 |
| 4.3 本章小结 | 第126-127页 |
| 第五章 棕榈酰转移酶AkrA参与维持胞内钙离子稳态及作为潜在药物靶点的研究 | 第127-160页 |
| 5.1 曲霉中NFAT同源蛋白的比对 | 第129-130页 |
| 5.2 AkrA的遗传表型及定位 | 第130-137页 |
| 5.3 棕榈酰转移酶AkrA蛋白中DHHC结构域的功能研究 | 第137-140页 |
| 5.4 AkrA与钙离子信号通路成员相互关系的研究 | 第140-144页 |
| 5.5 AkrA参与调节胞内钙离子动态平衡的研究 | 第144-150页 |
| 5.6 AkrA蛋白DHHC结构域中半胱氨酸的功能研究 | 第150-154页 |
| 5.7 构巢曲霉中可能被棕榈酰转移酶AkrA棕榈酰化修饰的蛋白初步研究 | 第154-156页 |
| 5.8 akrA基因缺失对唑类药物敏感性的改变 | 第156-158页 |
| 5.9 本章小结 | 第158-160页 |
| 第六章 总结及展望 | 第160-165页 |
| 6.1 磷酸甘露糖变位酶PmmA | 第160-161页 |
| 6.2 乙酰辅酶A酰基转移酶Erg10A | 第161-163页 |
| 6.3 棕榈酰转移酶AkrA | 第163-164页 |
| 6.4 展望 | 第164-165页 |
| 参考文献 | 第165-179页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第179-180页 |
| 致谢 | 第180页 |
