| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-30页 |
| 1.1 水稻条纹叶枯病的研究现状 | 第11-17页 |
| 1.1.1 病害的发生及危害 | 第11-12页 |
| 1.1.2 病害的症状特征 | 第12页 |
| 1.1.3 病害的病原物及其理化特性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 病害的免疫学 | 第13页 |
| 1.1.5 病害的寄主范围和传播介体 | 第13-14页 |
| 1.1.6 病害的成灾机制 | 第14页 |
| 1.1.7 防控措施 | 第14-17页 |
| 1.2 水稻条纹病毒(RICE STRIPE VIRUS,RSV)的研究进展 | 第17-23页 |
| 1.2.1 RSV基因组结构概况 | 第17-18页 |
| 1.2.2 RSV编码蛋白的功能研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.3 RSV的遗传多样性及致病性分化 | 第21-23页 |
| 1.3 本研究中用到的关键技术体系 | 第23-28页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术 | 第23-27页 |
| 1.3.2 双分子荧光互补技术 | 第27-28页 |
| 1.4 本研究的意义 | 第28-30页 |
| 2 NSVC4蛋白定位到胞间连丝途径鉴定 | 第30-46页 |
| 摘要 | 第30-31页 |
| 1 材料和方法 | 第31-37页 |
| 1.1 材料 | 第31页 |
| 1.1.1 本氏烟 | 第31页 |
| 1.1.2 菌株和质粒 | 第31页 |
| 1.1.3 主要试剂与实验仪器 | 第31页 |
| 1.2 方法 | 第31-37页 |
| 1.2.1 大肠杆菌DH5A感受态细胞 | 第31-32页 |
| 1.2.2 NSVC4基因片段扩増 | 第32页 |
| 1.2.3 PCR产物回收 | 第32-33页 |
| 1.2.4 NSVC4的GATEWAY入门载体构建 | 第33页 |
| 1.2.5 化学转化法转化感受态细胞 | 第33页 |
| 1.2.6 大肠杆菌质粒的提取 | 第33-34页 |
| 1.2.7 入门载体阳性质粒鉴定及测序 | 第34页 |
| 1.2.8 入门载体线性化 | 第34-35页 |
| 1.2.9 NSVC4基因的植物表达载体构建 | 第35页 |
| 1.2.10 农杆菌GV3101感受态细胞制备 | 第35页 |
| 1.2.11 植物表达载体转化农杆菌 | 第35-36页 |
| 1.2.12 重组质粒转化农杆菌的鉴定 | 第36页 |
| 1.2.13 转化农杆菌注射本氏烟 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-45页 |
| 2.1 NSVC4可以定位到胞间连丝 | 第37-38页 |
| 2.2 NSVC4蛋白通过ER-GOLGI分泌途径转运到胞间连丝 | 第38-40页 |
| 2.3 NSVC4与PDLP1A定位到胞间连丝的不同点 | 第40页 |
| 2.4 微丝组织参与了NSVC4蛋白到胞间连丝的运输 | 第40-41页 |
| 2.5 MYOSIN Ⅷ参与NSVC4蛋白到胞间连丝的运输 | 第41-45页 |
| 3 小结与讨论 | 第45-46页 |
| 3 NSVC4蛋白的致病性鉴定 | 第46-70页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 材料和方法 | 第47-56页 |
| 1.1 材料 | 第47-49页 |
| 1.1.1 RSV毒源和本氏烟 | 第47页 |
| 1.1.2 菌株和质粒 | 第47页 |
| 1.1.3 主要试剂与实验仪器 | 第47页 |
| 1.1.4 PCR引物 | 第47-49页 |
| 1.2 方法 | 第49-56页 |
| 1.2.1 RSV水稻病叶研磨和本氏烟摩擦接种 | 第49页 |
| 1.2.1.1 侵染本氏烟的RSV粗提液制备 | 第49页 |
| 1.2.1.2 RSV粗提液摩擦侵染本氏烟 | 第49页 |
| 1.2.2 总RNA提取 | 第49-50页 |
| 1.2.2.1 水稻RSV病叶总RNA的提取 | 第50页 |
| 1.2.2.2 本氏烟总RNA的提取 | 第50页 |
| 1.2.3 RT-PCR扩增RSV编码基因 | 第50-51页 |
| 1.2.4 PVX载体和目的回收片段的双酶切 | 第51页 |
| 1.2.5 连接 | 第51-52页 |
| 1.2.6 大肠杆菌转化 | 第52页 |
| 1.2.7 阳性克隆的鉴定筛选 | 第52页 |
| 1.2.8 双酶切阳性克隆鉴定 | 第52页 |
| 1.2.9 测序验证构建好的载体 | 第52页 |
| 1.2.10 目的基因的BIFC和细胞定位载体构建 | 第52-53页 |
| 1.2.11 农杆菌转化及本氏烟侵染 | 第53页 |
| 1.2.12 PTRV-NSVC4基因沉默载体构建 | 第53页 |
| 1.2.13 PTRV-NSVC4载体转化农杆菌注射本氏烟及RSV侵染 | 第53页 |
| 1.2.14 NSVC4和CP基因的酵母互作载体构建 | 第53页 |
| 1.2.15 诱饵载体质粒转化酵母菌 | 第53-54页 |
| 1.2.16 捕获载体质粒转化酵母菌 | 第54-55页 |
| 1.2.17 三缺筛选培养基互做鉴定 | 第55页 |
| 1.2.18 显色实验(B-GALACTOSIDASE蛋白活性检测) | 第55-56页 |
| 1.2.19 REAL-TIME PCR | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-67页 |
| 2.1 RSV侵染本氏烟 | 第56-58页 |
| 2.2 利用PTRV载体干扰NSVC4 | 第58-59页 |
| 2.3 RSV编码基因在本氏烟中的细胞定位 | 第59-62页 |
| 2.4 NSVC4蛋白与CP蛋白互作 | 第62-64页 |
| 2.5 NSVC4和CP蛋白的致病功能鉴定 | 第64页 |
| 2.6 PVX及其相关载体在侵染本氏烟中的表达量检测 | 第64-67页 |
| 3 小结与讨论 | 第67-70页 |
| 4 以NSVC4为诱饵蛋白筛选拟南芥酵母文库 | 第70-106页 |
| 摘要 | 第70页 |
| 1 材料和方法 | 第70-80页 |
| 1.1 材料 | 第70-74页 |
| 1.1.1 RSV毒源和本氏烟 | 第70-71页 |
| 1.1.2 菌株、质粒和拟南芥酵母文库 | 第71页 |
| 1.1.3 主要试剂与实验仪器 | 第71页 |
| 1.1.4 PCR引物 | 第71-74页 |
| 1.2 方法 | 第74-80页 |
| 1.2.1 酵母相关载体的构建 | 第74-75页 |
| 1.2.2 诱饵载体转化酵母菌NMY51 | 第75页 |
| 1.2.3 酵母双杂交筛选文库操作步骤 | 第75-76页 |
| 1.2.4 酵母质粒回收及转化大肠杆菌 | 第76-77页 |
| 1.2.5 转化大肠杆菌的文库质粒提取,酶切鉴定及测序 | 第77-78页 |
| 1.2.6 插入片段序列分析 | 第78页 |
| 1.2.7 拟南芥总RNA的提取 | 第78页 |
| 1.2.8 可能互作的拟南芥基因的克隆及酵母载体的构建 | 第78页 |
| 1.2.9 各构建载体的质粒提取、酶切鉴定及序列验证 | 第78-79页 |
| 1.2.10 构建好的载体进行酵母转化和互作验证 | 第79页 |
| 1.2.11 筛库基因的植物定位载体和BIFC载体的构建 | 第79页 |
| 1.2.12 构建好的植物定位载体及BIFC载体转化农杆菌 | 第79页 |
| 1.2.13 农杆菌注射本氏烟和结果观察 | 第79-80页 |
| 1.2.14 REAL-TIME PCR | 第80页 |
| 2. 结果与分析 | 第80-103页 |
| 2.1 文库筛选初步结果 | 第80页 |
| 2.2 文库质粒插入片段的序列分析和初步功能分析 | 第80-82页 |
| 2.3 克隆筛库基因的完整阅读框 | 第82页 |
| 2.4 完整ORF基因的酵母载体构建 | 第82-83页 |
| 2.5 完整ORF基因的入门载体PDONR221构建 | 第83页 |
| 2.6 各基因PEARLEY101、PEARLEY102和YN载体构建 | 第83页 |
| 2.7 构建好的植物定位载体和BIFC载体转化农杆菌 | 第83页 |
| 2.8 互作基因的进一步鉴定及功能推测 | 第83-103页 |
| 2.8.1 与NSVC4互作的蛋白NN-76 | 第83-88页 |
| 2.8.2 与NSVC4互作的蛋白NN-80 | 第88-91页 |
| 2.8.3 与NSVC4互作的蛋白NN-104 | 第91-95页 |
| 2.8.4 与NSVC4互作的蛋白NN-133 | 第95-99页 |
| 2.8.5 与NSVC4互作的蛋白NN-135 | 第99-103页 |
| 3 PTRV载体介导的基因沉默鉴定互作蛋白功能 | 第103页 |
| 4 小结与讨论 | 第103-106页 |
| 参考文献 | 第106-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
