| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 类泛素化修饰（SUMOylation）概述 | 第17-23页 |
| 1.1.1 SUMO化修饰研究进展 | 第17-21页 |
| 1.1.2 SUMO的主要生物学功能 | 第21-23页 |
| 1.2 SUMO化与病毒之间的关系 | 第23-24页 |
| 1.2.1 与宿主SUMO化系统发生相互作用的病毒蛋白 | 第23-24页 |
| 1.2.2 需要被宿主SUMO化修饰来发挥作用的病毒蛋白 | 第24页 |
| 1.3 杆状病毒研究概况 | 第24-27页 |
| 1.3.1 杆状病毒的分类 | 第24-25页 |
| 1.3.2 家蚕核型多角体病毒基因组学研究进展 | 第25-26页 |
| 1.3.3 杆状病毒早期关键基因pe38研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第27页 |
| 1.5 本论文主要研究内容 | 第27-29页 |
| 第2章外源刺激对家蚕SUMO化基因表达的影响 | 第29-38页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第29页 |
| 2.2.2 主要实验仪器和设备 | 第29-30页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.3.1 病原接种 | 第30-31页 |
| 2.3.2 家蚕细胞及组织总RNA的提取和鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 RNA的纯度、浓度测定 | 第32页 |
| 2.3.4 反转录实验 | 第32页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR | 第32-34页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR的结果分析 | 第34页 |
| 2.4 结果与分析 | 第34-37页 |
| 2.4.1 BmNPV感染BmN细胞后SUMO化基因表达变化 | 第34-35页 |
| 2.4.2 蚕体内外源刺激影响SUMO化基因mRNA水平表达变化 | 第35-37页 |
| 2.5 讨论 | 第37-38页 |
| 第3章 SUMO化修饰底物蛋白的筛选与鉴定 | 第38-62页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-41页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.2 主要实验仪器和设备 | 第39页 |
| 3.2.3 主要试剂的配制 | 第39-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-49页 |
| 3.3.1 家蚕SUMO、Ubc9基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组质粒pFastBac1-EGFP-SUMO、pFastBac1-EGFP-UBC9-SUMO的构建及序列测定 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组家蚕杆状病毒质粒Bacmid的获得与鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.4 家蚕BmN细胞的转染与感染 | 第44页 |
| 3.3.5 病毒感染BmN细胞的裂解 | 第44-45页 |
| 3.3.6 免疫共沉淀实验 | 第45页 |
| 3.3.7Western blot分析检测目的蛋白表达 | 第45-46页 |
| 3.3.8 LC–ESI-MS/MS蛋白鉴定、SUMO化位点预测以及SUMO化底物蛋白功能分析 | 第46-47页 |
| 3.3.9 免疫印迹与免疫沉淀对SUMO化底物的验证分析 | 第47-49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-59页 |
| 3.4.1 家蚕SUMO、Ubc9基因的PCR扩增及昆虫表达载体的重组构建 | 第49-50页 |
| 3.4.2 重组杆状病毒的构建与鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4.3 EGFP-SUMO、EGFP-SUMO-Ubc9融合蛋白在BmN细胞中的表达 | 第51-52页 |
| 3.4.4 免疫沉淀和免疫印迹共同筛选BmN细胞中SUMO化修饰底物蛋白 | 第52-53页 |
| 3.4.5LC–ESI-MS/MS 质谱分析鉴定 SUMO 化底物蛋白 | 第53-55页 |
| 3.4.6Gene Ontology（GO分析）注释SUMO化底物蛋白 | 第55-56页 |
| 3.4.7 免疫共沉淀进一步验证SUMO化修饰底物 | 第56-59页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第59-62页 |
| 第4章 BmNPV PE38蛋白与家蚕Bm SRPK、Bm eIF4E蛋白相互作用的验证 | 第62-74页 |
| 4.1 前言 | 第62页 |
| 4.2 材料与主要试剂 | 第62-64页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第62页 |
| 4.2.2 主要实验仪器和设备 | 第62页 |
| 4.2.3 主要试剂的配制 | 第62-64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-67页 |
| 4.3.1 反向酵母双杂交技术验证蛋白互作 | 第64-66页 |
| 4.3.2 BmNPV感染家蚕BmN细胞后Bmsrpk和Bm eIF4E基因时相表达分析 | 第66-67页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第67-70页 |
| 4.4.1 家蚕eIF4E、srpk和BmNPV pe38基因的PCR扩增以及酵母表达载体的构建 | 第67-68页 |
| 4.4.2 重组载体的自激活检测和毒性检测 | 第68页 |
| 4.4.3 阳性克隆的筛选及蛋白相互作用的验证 | 第68-69页 |
| 4.4.4 BmN细胞感染BmNPV后Bm eIF4E和Bm srpk基因时相表达分析 | 第69-70页 |
| 4.5 讨论 | 第70-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-86页 |
| 附录 | 第86-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
