| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪言 | 第14-26页 |
| 1.1 含单质碘药物的现状 | 第14页 |
| 1.2 含单质碘药物的发展 | 第14-15页 |
| 1.3 碘分子杀菌消毒的作用机制和对人体的伤害性刺激作用 | 第15-16页 |
| 1.4 铅污染现状 | 第16页 |
| 1.5 临床铅中毒研究 | 第16-17页 |
| 1.6 TRPA1通道与疼痛感受 | 第17-19页 |
| 1.7 TRPA1通道与炎症反应 | 第19-21页 |
| 1.8 实验证据表明碘激活TRPA1受体通道 | 第21页 |
| 1.9 TRPA1是哺乳动物的伤害性化学感受器 | 第21-26页 |
| 第二章 碘刺激性作用靶点发现和机制研究 | 第26-66页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第26-30页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂、药品 | 第26-28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28-30页 |
| 2.2 主要溶液及配制 | 第30-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-42页 |
| 2.3.1 TRPA1稳转细胞系的培养和传代 | 第34-35页 |
| 2.3.1.1 细胞的冻存和复苏 | 第34-35页 |
| 2.3.1.2 细胞的传代 | 第35页 |
| 2.3.2 人和小鼠TRPA1通道基因的转染 | 第35页 |
| 2.3.3 细胞内钙荧光信号检测 | 第35-36页 |
| 2.3.3.1 细胞培养板的包被和细胞传代 | 第35-36页 |
| 2.3.3.2 细胞Fura-2染色 | 第36页 |
| 2.3.3.3 酶标仪检测钙荧光信号检测 | 第36页 |
| 2.3.4 定点突变 | 第36-37页 |
| 2.3.4.1 质粒的转化克隆 | 第36页 |
| 2.3.4.2 细菌的扩大培养和质粒的提取 | 第36-37页 |
| 2.3.4.3 基因的定点突变 | 第37页 |
| 2.3.5 电极电压钳记录TRPA1通道电流 | 第37-38页 |
| 2.3.5.1 TRPA1通道基因的RNA合成 | 第37页 |
| 2.3.5.2 电极电压钳记录通道电流 | 第37-38页 |
| 2.3.6 膜片钳记录TRPA1通道全细胞电流 | 第38页 |
| 2.3.7 DRG神经元钙荧光成像 | 第38-39页 |
| 2.3.7.1 小鼠基因型鉴定 | 第39页 |
| 2.3.7.2 小鼠DRG神经元的原代培养 | 第39页 |
| 2.3.7.3 钙荧光成像 | 第39页 |
| 2.3.8 小鼠痛行为测定 | 第39-40页 |
| 2.3.9 小鼠接触性皮炎模型的重建和实验 | 第40页 |
| 2.3.10 药物的注射方式和剂量 | 第40-41页 |
| 2.3.10.1 小鼠痛觉反应模型中HC030031的注射方式和剂量(按每只小鼠20 g计算) | 第40-41页 |
| 2.3.10.2 小鼠接触性皮炎模型药物注射方式和剂量(按每只小鼠20g计算) | 第41页 |
| 2.3.11 耳组织切片制作 | 第41-42页 |
| 2.3.12 ELISA检测炎性因子 | 第42页 |
| 2.4 实验结果 | 第42-59页 |
| 2.4.1 碘特异性激活TRPA1通道 | 第42-44页 |
| 2.4.1.1 不同载体的碘制剂均可激活外源性表达在HEK293细胞hTRPA1通道 | 第42-43页 |
| 2.4.1.2 碘特异性激活外源性表达在HEK293细胞hTRPA1通道介导的钙离子内流 | 第43-44页 |
| 2.4.2 碘作用于TRPA1通道的机制研究 | 第44-48页 |
| 2.4.2.1 碘激活TRPA1通道剂量效应关系 | 第44-47页 |
| 2.4.2.2 碘激活TRPA1的关键氨基酸位点和分子机制 | 第47-48页 |
| 2.4.3 碘特异性激活DRG神经元中TRPA1通道介导的钙内流 | 第48-50页 |
| 2.4.3.1 碘激活DRG神经元中TRPA1通道介导的细胞外钙内流 | 第48-49页 |
| 2.4.3.2 TRPA1~(-/-)小鼠中碘激活神经元比例降低 | 第49-50页 |
| 2.4.4 TRPA1通道介导碘诱导小鼠产生痛觉反应 | 第50-52页 |
| 2.4.4.1 碘诱导小鼠产生痛觉反应 | 第50-51页 |
| 2.4.4.2 碘诱导小鼠产生的痛觉反应可被TRPA1通道抑制剂减弱 | 第51页 |
| 2.4.4.3 碘诱导小鼠产生的痛觉反应在TRPA1~(-/-)小鼠中明显降低 | 第51-52页 |
| 2.4.5 TRPA1通道介导碘促进接触性皮炎 | 第52-59页 |
| 2.4.5.1 恶唑酮诱导的炎症模型中诱导后炎症反应与诱导的恶唑酮浓度成正比 | 第52-53页 |
| 2.4.5.2 碘浓度依赖性的促进小鼠接触性皮炎 | 第53-55页 |
| 2.4.5.3 TRPA1通道抑制剂HC030031降低碘对迟发型炎症的促进作用 | 第55-56页 |
| 2.4.5.4 SP的受体抑制剂降低碘对接触性皮炎的促进作用 | 第56页 |
| 2.4.5.5 CGRP的受体抑制剂不影响碘对接触性皮炎的促进作用 | 第56-57页 |
| 2.4.5.6 碘促进小鼠接触性皮炎在TRPA1~(-/-)小鼠作用明显降低 | 第57-59页 |
| 2.5 讨论 | 第59-63页 |
| 2.5.1 碘特异性激活TRPA1通道 | 第59页 |
| 2.5.2 碘作用于TRPA1通道的机制和位点研究 | 第59-60页 |
| 2.5.3 碘特异性激活DRG神经元上TRPA1通道介导的钙离子内流 | 第60页 |
| 2.5.4 TRPA1通道介导碘诱导小鼠产生痛觉反应 | 第60-61页 |
| 2.5.5 TRPA1通道介导碘促进接触性皮炎 | 第61-63页 |
| 2.6 小结 | 第63-66页 |
| 2.6.1 碘特异性激活TRPA1通道 | 第63页 |
| 2.6.2 碘作用于TRPA1通道的机制和位点研究 | 第63页 |
| 2.6.3 碘特异性激活DRG神经元上TRPA1通道介导的钙离子内流 | 第63页 |
| 2.6.4 TRPA1通道介导碘诱导小鼠产生痛觉反应 | 第63-64页 |
| 2.6.5 TRPA1通道介导碘促进接触性皮炎 | 第64-66页 |
| 第三章 铅离子作用靶点和机制的研究 | 第66-78页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第66-69页 |
| 3.1.1 主要试剂、药品 | 第66-68页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第68-69页 |
| 3.2 主要溶液及配制 | 第69-70页 |
| 3.3 实验方法 | 第70-72页 |
| 3.3.1 人和小鼠TRPA1通道基因的转染 | 第70-71页 |
| 3.3.2 细胞内钙荧光信号检测 | 第71页 |
| 3.3.2.1 细胞培养板的包被和细胞传代 | 第71页 |
| 3.3.2.2 细胞Fura-2染色 | 第71页 |
| 3.3.2.3 酶标仪检测钙荧光信号检测 | 第71页 |
| 3.3.3 双电极电压钳记录TRPA1通道电流 | 第71-72页 |
| 3.3.3.1 TRPA1通道基因的RNA合成 | 第71-72页 |
| 3.3.3.2 电极电压钳记录通道电流 | 第72页 |
| 3.4 实验结果 | 第72-76页 |
| 3.4.1 铅离子抑制外源性表达在HEK293细胞的小鼠和人TRPA1通道介导的钙离子内流 | 第72-74页 |
| 3.4.2 铅离子抑制TRPA1通道介导的电流 | 第74-75页 |
| 3.4.3 铅离子抑制DRG中TRPA1通道介导细胞外钙内流 | 第75-76页 |
| 3.5 讨论 | 第76-77页 |
| 3.6 小结 | 第77-78页 |
| 第四章 总结与展望 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
