| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.2 立题依据 | 第13-18页 |
| 1.2.1 莱氏野村菌的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.2 微菌核的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.3 交替氧化酶（AOX）的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 研究目的 | 第18-19页 |
| 1.4 研究内容和技术路线 | 第19-20页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第19页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 1.5 本实验创新之处 | 第20-22页 |
| 2 莱氏野村菌Nraox基因的克隆与分析 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料及主要试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.1 供试菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备及其厂家 | 第23页 |
| 2.1.4 主要培养基和溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要使用到的生物学软件 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 莱氏野村菌菌种活化 | 第24页 |
| 2.2.2 孢悬液的配制及微菌核的培养 | 第24页 |
| 2.2.3 提取莱氏野村菌微菌核总RNA及其消化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 cDNA序列克隆测序 | 第25-28页 |
| 2.2.5 莱氏野村菌基因组提取 | 第28页 |
| 2.2.6 PCR产物的克隆与测序 | 第28-29页 |
| 2.2.7 全长cDNA的测通及基因组的克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.8 AOX的生物信息学及进化分析 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-40页 |
| 2.3.1 Nraox的扩增 | 第31页 |
| 2.3.2 Nraox基因组的扩增及结构分析 | 第31-32页 |
| 2.3.3 AOX蛋白序列的生物信息学分析 | 第32-40页 |
| 3 莱氏野村菌Nraox基因表达模式分析 | 第40-46页 |
| 3.1 主要实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.3 主要设备及仪器 | 第40页 |
| 3.1.4 主要培养基及溶液 | 第40页 |
| 3.2 主要实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 实验材料的收集 | 第40页 |
| 3.2.2 微菌核形成不同时期菌体RNA的提取及cDNA合成 | 第40-41页 |
| 3.2.3 RT-qPCR引物设计 | 第41-42页 |
| 3.2.4 定量引物标准曲线的制作 | 第42页 |
| 3.2.5 检测Nraox基因的表达量 | 第42页 |
| 3.2.6 RT-qPCR数据处理 | 第42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 定量引物的扩增效率及特异性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.2 Nraox的表达模式分析 | 第43-46页 |
| 4 氧胁迫/抑制剂对Nraox基因、细胞内H2O2含量及微菌核发育的影响 | 第46-52页 |
| 4.1 主要实验材料 | 第46页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 主要设备及仪器 | 第46页 |
| 4.1.4 主要培养基及溶液的配制 | 第46页 |
| 4.2 主要实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 氧胁迫诱导剂/抑制剂处理后检测基因表达量 | 第46-47页 |
| 4.2.2 抑制剂处理后细胞内过氧化氢含量的测定 | 第47页 |
| 4.2.3 抑制剂处理后菌丝及微菌核形态、微菌核数量和生物量的测定 | 第47-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.3.1 氧胁迫诱导剂/抑制剂对基因表达模式的影响分析 | 第48页 |
| 4.3.2 抑制剂处理后对细胞内H2O2含量影响的分析 | 第48-49页 |
| 4.3.3 抑制剂对莱氏野村菌微菌核分化的影响 | 第49-52页 |
| 5 RNA干扰技术验证Nraox基因的功能 | 第52-62页 |
| 5.1 试验材料 | 第52-53页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第52页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 5.1.3 主要设备仪器 | 第52页 |
| 5.1.4 主要培养基和溶液 | 第52-53页 |
| 5.2 主要试验方法 | 第53-57页 |
| 5.2.1 莱氏野村菌Nraox的dsRNA的合成 | 第53-55页 |
| 5.2.2 siRNA的合成 | 第55-56页 |
| 5.2.3 siRNA的转化 | 第56页 |
| 5.2.4 siRNA最适浓度的确定 | 第56-57页 |
| 5.2.5 胁迫条件下菌落形态观察及产孢量测定 | 第57页 |
| 5.2.6 菌丝及微菌核形态、微菌核数量及生物量的测定 | 第57页 |
| 5.2.7 毒力测定 | 第57页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第57-62页 |
| 5.3.1 RNA干扰效率的分析 | 第57-58页 |
| 5.3.2 胁迫条件下对菌株生长的影响 | 第58-59页 |
| 5.3.3 RNA干扰处理后对微菌核分化的影响 | 第59-61页 |
| 5.3.4 RNA干扰对微菌核毒力的影响 | 第61-62页 |
| 6 讨论 | 第62-66页 |
| 6.1 Nraox在微菌核发育中的作用 | 第62-63页 |
| 6.2 Nraox对莱氏野村菌微菌核毒力的影响 | 第63-66页 |
| 7 主要结论和后续研究 | 第66-68页 |
| 7.1 主要结论 | 第66页 |
| 7.2 后续工作建议 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76页 |
| A作者在攻读硕士学位期间发表论文目录 | 第76页 |
