| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略表(Abbreviation) | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 猪嵴病毒的发现 | 第11页 |
| 2 猪嵴病毒的生物学分类地位 | 第11-12页 |
| 3 猪嵴病毒流行病学的研究进展 | 第12-15页 |
| 3.1 嵴病毒流行病学概述 | 第12-14页 |
| 3.2 猪嵴病毒的感染日龄 | 第14页 |
| 3.3 猪嵴病毒的感染途径与多发季节 | 第14-15页 |
| 4 猪嵴病毒的病原学概述 | 第15-18页 |
| 4.1 嵴病毒的基因组结构 | 第15-16页 |
| 4.2 猪嵴病毒的基因组成以及其编码的蛋白 | 第16-17页 |
| 4.3 猪嵴病毒的理化特性 | 第17页 |
| 4.4 猪嵴病毒旳培养特性 | 第17页 |
| 4.5 猪嵴病毒的变异 | 第17-18页 |
| 5 猪嵴病毒的诊断方法 | 第18-19页 |
| 5.1 电镜技术 | 第18页 |
| 5.2 血清学以及免疫学方法 | 第18-19页 |
| 5.3 分子生物学方法 | 第19页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 猪嵴病毒swKoV CH441株VP1基因的克隆与序列分析 | 第21-30页 |
| 1 实验材料 | 第21页 |
| 1.1 实验样本 | 第21页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第21页 |
| 1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第22页 |
| 2.3 基因扩增 | 第22页 |
| 2.4 基因克隆与测序 | 第22页 |
| 2.5 序列分析 | 第22页 |
| 2.6 生物信息学分析 | 第22-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-28页 |
| 3.1 swKoV CH441株VP1的RT-PCR扩增 | 第23页 |
| 3.2 双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 3.3 猪嵴病毒swKoV CH441株VP1基因核苷酸序列分析及遗传进化分析 | 第24-26页 |
| 3.4 VP1基因编码产物的理化性质分析 | 第26页 |
| 3.5 信号肽分析 | 第26页 |
| 3.6 跨膜区分析 | 第26页 |
| 3.7 磷酸化位点的预测 | 第26-27页 |
| 3.8 VP1基因编码产物的二级结构预测 | 第27页 |
| 3.9 VP1基因编码产物的三级结构预测 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 VP3基因的克隆分析及原核表达 | 第30-41页 |
| 1 实验材料 | 第30页 |
| 1.1 实验样本 | 第30页 |
| 1.2 器材和试剂 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-34页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第30页 |
| 2.2 病毒RNA的提取 | 第30页 |
| 2.3 目的基因扩增 | 第30页 |
| 2.4 目的基因克隆与测序 | 第30-31页 |
| 2.6 重组表达质粒PET30a-VP3的构建 | 第31页 |
| 2.7 目的蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第31-32页 |
| 2.8 诱导表达目的蛋白条件的优化 | 第32页 |
| 2.9 用His标签抗体做Western-blot检测表达产物 | 第32页 |
| 2.10 重组表达菌PET30a-VP3-BL21的扩大培养及目的蛋白的纯化 | 第32-34页 |
| 2.11 猪源高免血清的制备 | 第34页 |
| 2.12 目的蛋白反应原性的检测 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-40页 |
| 3.1 swKoV CH441株VP3基因的RT-PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| 3.2 重组质粒pMD19-T(simple)-VP3双酶切鉴定 | 第35页 |
| 3.3 猪嵴病毒swKoV CH441株VP3基因序列分析 | 第35-36页 |
| 3.4 重组表达质粒PET30a-VP3双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.5 目的蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第37页 |
| 3.6 诱导表达目的蛋白条件的优化 | 第37-38页 |
| 3.7 His标签抗体检测表达产物 | 第38-39页 |
| 3.9 目的蛋白反应原性的检测 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 猪嵴病毒间接ELISA方法的建立与应用 | 第41-49页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| 1.1 主要实验材料 | 第41页 |
| 1.2 主要仪器 | 第41页 |
| 1.3 主要试剂 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-44页 |
| 2.1 方阵滴定法确定VP3蛋白的最佳包被浓度和血清最佳稀释度 | 第41-42页 |
| 2.2 最佳抗原包被条件的确定 | 第42页 |
| 2.3 最佳封闭液的确定 | 第42页 |
| 2.4 最佳封闭条件的确定 | 第42页 |
| 2.5 最佳血清稀释液的确定 | 第42页 |
| 2.6 最佳血清作用时间的确定 | 第42-43页 |
| 2.7 酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第43页 |
| 2.8 酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第43页 |
| 2.9 底物最佳作用时间的确定 | 第43页 |
| 2.10 临界值的确定 | 第43页 |
| 2.11 特异性试验 | 第43页 |
| 2.12 重复性试验 | 第43页 |
| 2.13 临床血清样品的检测 | 第43-44页 |
| 3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.1 方阵滴定法确定蛋白的最佳包被浓度和血清最佳稀释度 | 第44页 |
| 3.2 最佳抗原包被条件的确定 | 第44-45页 |
| 3.3 最佳封闭液的确定 | 第45页 |
| 3.4 最佳封闭时间的确定 | 第45页 |
| 3.5 最佳血清稀释液的确定 | 第45-46页 |
| 3.6 最佳血清作用时间的确定 | 第46页 |
| 3.7 酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第46页 |
| 3.8 确定酶标二抗的最佳作用时间 | 第46-47页 |
| 3.9 底物最佳作用时间的确定 | 第47页 |
| 3.10 临界值的确定 | 第47页 |
| 3.11 特异性试验 | 第47页 |
| 3.12 重复性试验 | 第47-48页 |
| 3.13 临床血清样品的检测 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录1实验所用的主要仪器 | 第54-55页 |
| 附录2实验所用的主要试剂 | 第55-56页 |
| 附录3溶液的配制方法 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58-59页 |
| 导师简介 | 第59-60页 |
