| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 慢性髓细胞性白血病 | 第9-10页 |
| 1.2 CML的临床分期 | 第10-11页 |
| 1.3 酪氨酸激酶抑制剂IM是CML治疗的临床一线用药 | 第11-12页 |
| 1.4 IM耐药 | 第12-15页 |
| 1.4.1 BCR-ABL点突变引起的IM耐药 | 第12-13页 |
| 1.4.2 BCR-ABL基因扩增引起的IM耐药 | 第13页 |
| 1.4.3 BCR-ABL非依赖性白血病细胞克隆引起的IM耐药 | 第13-14页 |
| 1.4.4 CML干细胞是IM耐药的源头因素 | 第14-15页 |
| 1.5 调控CML干细胞的信号通路 | 第15-16页 |
| 1.6 组蛋白赖氨酸甲基转移酶EZH | 第16-17页 |
| 1.7 常用的EZH2抑制剂 | 第17-19页 |
| 1.8 科学问题和工作假设 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-44页 |
| 2.1 细胞系 | 第20页 |
| 2.2 CML病人样本 | 第20-21页 |
| 2.3 仪器 | 第21页 |
| 2.4 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.5 主要抗体 | 第22-25页 |
| 2.5.1 Western blot抗体名称、货号、生产厂家及稀释比例 | 第22-24页 |
| 2.5.2 流式抗体信息如下表所示 | 第24-25页 |
| 2.6 溶液 | 第25-27页 |
| 2.7 主要研究方法 | 第27-44页 |
| 2.7.1 化合物溶解及储存 | 第27页 |
| 2.7.2 细胞培养 | 第27页 |
| 2.7.3 原代细胞培养及分选 | 第27-28页 |
| 2.7.4 CML病人干细胞凋亡检测 | 第28-29页 |
| 2.7.5 CML病人原代干/祖细胞静止期细胞凋亡检测 | 第29页 |
| 2.7.6 原代细胞集落形成及连续传代实验(CFC/replatingassay) | 第29-30页 |
| 2.7.7 细胞活力检测 | 第30页 |
| 2.7.8 软琼脂克隆形成实验 | 第30-31页 |
| 2.7.9 AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡 | 第31页 |
| 2.7.10 蛋白提取及Westernblot实验 | 第31-32页 |
| 2.7.11 线粒体膜电位检测 | 第32-33页 |
| 2.7.12 CaCl2法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第33页 |
| 2.7.13 质粒转化及提取 | 第33-34页 |
| 2.7.14 慢病毒包装及细胞感染 | 第34页 |
| 2.7.15 慢病毒及逆转录病毒包装 | 第34-35页 |
| 2.7.16 CML细胞感染 | 第35页 |
| 2.7.17 BCR-ABL诱导的白血病模型复制 | 第35页 |
| 2.7.18 第一代CML小鼠模型复制 | 第35-36页 |
| 2.7.19 CML第二代小鼠移植、敲低及给药实验 | 第36-39页 |
| 2.7.20 有限稀释法检测体内白血病干细胞比例 | 第39页 |
| 2.7.21 实时荧光定量PCR实验 | 第39-41页 |
| 2.7.22 染色质免疫共沉淀实验(ChIP) | 第41-43页 |
| 2.7.23 数据分析 | 第43-44页 |
| 3 实验结果 | 第44-81页 |
| 3.1 敲低EZH2可抑制IM敏感及耐药性T315I突变的CML细胞的增殖 | 第44-45页 |
| 3.2 GSK126用药处理显著抑制IM敏感及耐药的T315I突变的CML细胞生长 | 第45-47页 |
| 3.3 GSK126呈时间及剂量依赖性诱导IM敏感及耐药的T315I突变的CML细胞凋亡 | 第47-51页 |
| 3.4 EZH2在CML病人干细胞中高表达 | 第51-52页 |
| 3.5 GSK126选择性诱导CML病人干细胞发生凋亡 | 第52-53页 |
| 3.6 GSK126诱导静止期CMLCD34~+细胞凋亡 | 第53-55页 |
| 3.7 GSK126可选择性抑制CMLCD34~+干/祖细胞的自我更新 | 第55页 |
| 3.8 GSK126可抑制CML小鼠脾脏肿大及结节 | 第55-56页 |
| 3.9 GSK126显著延长CML小鼠生存期 | 第56-57页 |
| 3.10 GSK126降低CML小鼠体内白血病细胞及髓系细胞比例 | 第57-58页 |
| 3.11 GSK126显著降低CML小鼠中白血病干细胞比例 | 第58-59页 |
| 3.12 GSK126可下调CML小鼠体内白血病祖细胞比例 | 第59-60页 |
| 3.13 敲低EZH2可抑制CML小鼠脾脏肿大及结节 | 第60-62页 |
| 3.14 敲低EZH2可显著延长CML小鼠生存期 | 第62页 |
| 3.15 敲低EZH2降低CML小鼠体内白血病细胞及髓系细胞比例 | 第62-63页 |
| 3.16 敲低EZH2可下调CML小鼠中白血病干细胞比例 | 第63-64页 |
| 3.17 敲低EZH2可下调CML小鼠中白血病祖细胞比例 | 第64-65页 |
| 3.18 用GSK126抑制EZH2甲基转移酶活性或用shRNA沉默EZH2的表达对HSCs无明显影响 | 第65-67页 |
| 3.19 敲低EZH2可下调CML小鼠中白血病干细胞的频率 | 第67-69页 |
| 3.20 敲低EZH2可上调PTEN、p27并下调c-Myc的蛋白水平 | 第69-70页 |
| 3.21 敲低EZH2可上调CML小鼠LSK中PTEN的蛋白水平 | 第70-71页 |
| 3.22 敲低EZH2促进K562细胞中PTEN的基因转录 | 第71-72页 |
| 3.23 GSK126促进CMLCD34~+干/祖细胞中PTEN的基因转录 | 第72页 |
| 3.24 敲低EZH2可抑制PTEN启动子上EZH2及H3K27m3的募集 | 第72-73页 |
| 3.25 敲低EZH2可抑制AKT/mTOR信号通路 | 第73-74页 |
| 3.26 IM可加强EZH2敲低引起的AKT/mTOR信号抑制 | 第74-75页 |
| 3.27 EZH2敲低引起的PTEN转录水平上调不依赖于BCR-ABL | 第75页 |
| 3.28 敲低PTEN部分逆转EZH2敲低引起的CML小鼠白血病缓解 | 第75-78页 |
| 3.29 敲低PTEN部分逆转EZH2敲低引起的CML干细胞及祖比例减少 | 第78-81页 |
| 4 讨论 | 第81-85页 |
| 4.1 靶向EZH2可克服T315I突变引起的CML对TKI耐药 | 第81-82页 |
| 4.2 EZH2可能是克服BCR-ABL非依赖性克隆增生引起的TKIs耐药的重要靶标 | 第82页 |
| 4.3 IM可加强EZH2对PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制作用 | 第82-83页 |
| 4.4 BCR-ABL可能是引起EZH2在CMLLSCs中高表达的驱动基因 | 第83页 |
| 4.5 CMLLSCs干性的维持依赖于EZH2的甲基转移酶活性 | 第83页 |
| 4.6 抑制EZH2的活性可选择性杀伤CMLLSCs | 第83-84页 |
| 4.7 PTEN可能在EZH2调控LSCs干性的过程中发挥着桥梁作用 | 第84页 |
| 4.8 其余干性调控分子也可能参与到EZH2调控LSCs的过程中 | 第84-85页 |
| 5 结论 | 第85-86页 |
| 6 创新点 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-100页 |
| 附录Ⅰ：英文缩略词表 | 第100-103页 |
| 附录Ⅱ：攻读博士学位期间发表的论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
