| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 参考文献 | 第17-19页 |
| 第一部分 TGN肽修饰的聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯纳米粒的构建及脑内递药研究 | 第19-55页 |
| 第一章 TGN肽修饰的聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯共聚物纳米粒的构建与表征 | 第20-40页 |
| 1 仪器和材料 | 第20-22页 |
| 1.1 仪器 | 第20-21页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 溶液的配制 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.1 聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯共聚物的的合成及表征 | 第22-23页 |
| 2.2 共聚物材料的表征 | 第23页 |
| 2.3 TGN-PEG-PDMAEMA的合成 | 第23-24页 |
| 2.4 TGN肽HPLC分析方法的建立与评价 | 第24页 |
| 2.5 TGN肽与Mal-PEG-PDMAEMA连接效率的测定 | 第24-25页 |
| 2.6 报告基因的抽提 | 第25-26页 |
| 2.7 载基因纳米粒的制备及表征 | 第26-27页 |
| 2.8 稳定性考察 | 第27页 |
| 2.9 细胞毒性实验 | 第27-28页 |
| 3 实验结果 | 第28-38页 |
| 3.1 聚合物材料的核磁图谱分析 | 第28-30页 |
| 3.2 凝胶渗透色谱分子量的测定 | 第30页 |
| 3.3 TGN肽HPLC分析方法的评价 | 第30-32页 |
| 3.4 TGN肽与Mal-PEG-PDMAEMA连接效率的测定 | 第32页 |
| 3.5 载基因纳米粒的粒径和Zeta电位 | 第32-33页 |
| 3.6 透射电镜观察载基因纳米粒的形态 | 第33-34页 |
| 3.7 凝胶电泳阻滞分析 | 第34-35页 |
| 3.8 纳米粒的包封率测定 | 第35-36页 |
| 3.9 稳定性考察 | 第36-37页 |
| 3.10 载基因纳米粒对bEnd.3细胞的毒性 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 5 小结 | 第39-40页 |
| 第二章 TGN肽修饰的聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯共聚物纳米粒的脑内递药特性研究 | 第40-53页 |
| 1 仪器和材料 | 第40-41页 |
| 1.1 仪器 | 第40页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 实验动物 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-44页 |
| 2.1 MPEG-PDMAEMA介导绿色荧光蛋白报告基因的体外转染 | 第41页 |
| 2.2 TGN-PEG-PDMAMEMA/DNA纳米粒的体外转染研究 | 第41-42页 |
| 2.3 细胞摄取 | 第42-43页 |
| 2.4 荧光标记载基因纳米粒在裸鼠体内分布 | 第43页 |
| 2.5 体内表达效率考察 | 第43-44页 |
| 3 实验结果 | 第44-51页 |
| 3.1 MPEG-PDMAEMA介导绿色荧光蛋白报告基因的体外转染 | 第44-45页 |
| 3.2 TGN-PEG-PDMAMEMA/pEGFP纳米粒的体外转染研究 | 第45-47页 |
| 3.3 细胞摄取 | 第47-48页 |
| 3.4 活体成像观察 | 第48页 |
| 3.5 TGN-PEG-PDMAMEMA/DNA纳米粒体内表达效率考察 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第二部分 TGN肽修饰的聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯共聚物作为NGF基因递释载体研究 | 第55-98页 |
| 第一章 治疗基因克隆和重组表达载体的构建及质粒的提取鉴定 | 第56-68页 |
| 1 仪器和材料 | 第56-57页 |
| 1.1 仪器 | 第56页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第56-57页 |
| 2 实验方法 | 第57-63页 |
| 2.1 目的基因真核表达载体的构建流程 | 第57-58页 |
| 2.2 载体的酶切 | 第58-59页 |
| 2.3 目的基因片段的获取 | 第59-60页 |
| 2.4 重组质粒的构建 | 第60-62页 |
| 2.5 阳性克隆的PCR鉴定 | 第62页 |
| 2.6 阳性克隆测序 | 第62页 |
| 2.7 阳性克隆的扩增和质粒的大量抽提 | 第62-63页 |
| 3 实验结果 | 第63-67页 |
| 3.1 载体酶切结果 | 第63页 |
| 3.2 目的基因PCR结果 | 第63页 |
| 3.3 重组质粒构建及PCR鉴定 | 第63-64页 |
| 3.4 阳性克隆测序结果及结果分析 | 第64-67页 |
| 4 讨论 | 第67页 |
| 5 小结 | 第67-68页 |
| 第二章 TGN-PEG-PDMAEMA/NGF纳米粒的药效学研究 | 第68-89页 |
| 1 仪器和材料 | 第68-69页 |
| 1.1 仪器 | 第68页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第68-69页 |
| 1.3 实验动物 | 第69页 |
| 1.4 Aβ1-40溶液的配制 | 第69页 |
| 2 实验方法 | 第69-74页 |
| 2.1 载基因纳米粒的制备及表征 | 第69页 |
| 2.2 ELISA法测定脑内NGF的表达 | 第69-70页 |
| 2.3 小鼠AD模型的建立 | 第70页 |
| 2.4 实验分组与治疗方案 | 第70页 |
| 2.5 小鼠Morris水迷宫实验 | 第70-71页 |
| 2.6 生化指标的测定 | 第71-73页 |
| 2.7 组织切片的制备 | 第73-74页 |
| 3 实验结果 | 第74-86页 |
| 3.1 载NGF基因纳米粒的制备及表征 | 第74-75页 |
| 3.2 脑内NGF的定量表达 | 第75-76页 |
| 3.3 行为学评价 | 第76-80页 |
| 3.4 小鼠脑部皮层和海马中TChE活力测定 | 第80-82页 |
| 3.5 小鼠脑部皮层和海马中ChAT活力测定 | 第82-83页 |
| 3.6 脑部切片观察 | 第83-86页 |
| 4 讨论 | 第86-87页 |
| 4.1 多次给药的考虑 | 第86-87页 |
| 4.2 小鼠AD造模 | 第87页 |
| 5 小结 | 第87-89页 |
| 第三章 TGN肽修饰的聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯载基因纳米粒的体内急性毒性考察 | 第89-95页 |
| 1 仪器和材料 | 第89页 |
| 1.1 仪器 | 第89页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第89页 |
| 1.3 实验动物 | 第89页 |
| 2 实验方法 | 第89-90页 |
| 2.1 动物给药 | 第89-90页 |
| 2.2 石蜡切片的制备及染色 | 第90页 |
| 3 实验结果 | 第90-95页 |
| 3.1 对小鼠脑部组织的切片观察 | 第90-92页 |
| 3.2 对小鼠各主要脏器的切片观察 | 第92-95页 |
| 4 讨论 | 第95页 |
| 5 小结 | 第95页 |
| 参考文献 | 第95-98页 |
| 第三部分 TGN肽修饰聚乙二醇-聚甲基丙烯酸酯作为脑靶向基因载体的初步机理研究 | 第98-116页 |
| 1 仪器和材料 | 第98-99页 |
| 1.1 仪器 | 第98页 |
| 1.2 材料和试剂 | 第98-99页 |
| 2 实验方法 | 第99-102页 |
| 2.1 TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒在bEnd.3细胞内的摄取研究 | 第99-101页 |
| 2.2 激光共聚焦显微镜观察TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒在bEnd.3细胞内的转运 | 第101页 |
| 2.3 TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒在PC12细胞内的摄取研究 | 第101页 |
| 2.4 纳米粒脑内分布 | 第101-102页 |
| 2.5 脑内转染定位 | 第102页 |
| 3 实验结果 | 第102-112页 |
| 3.1 bEnd.3细胞摄取的浓度依赖性 | 第102-105页 |
| 3.2 bEnd.3细胞摄取的时间依赖性 | 第105-106页 |
| 3.3 细胞摄取抑制性实验 | 第106-108页 |
| 3.4 激光共聚焦显微镜观察TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒在bEnd.3细胞内的转运 | 第108-110页 |
| 3.5 TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒在PC12细胞内的摄取研究 | 第110-111页 |
| 3.6 纳米粒脑内分布 | 第111-112页 |
| 3.7 基因转染脑内定位 | 第112页 |
| 4 讨论 | 第112-113页 |
| 4.1 关于bEnd.3细胞对TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒的摄取行为 | 第112-113页 |
| 4.2 TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒介导基因转染的定位 | 第113页 |
| 4.3 TGN-PEG-PDMAEMA/DNA纳米粒细胞内过程 | 第113页 |
| 5 小结 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-116页 |
| 全文总结 | 第116-118页 |
| 主要创新点 | 第118-119页 |
| 后续工作及展望 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
