| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 猪瘟概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 世界范围内猪瘟流行情况 | 第11页 |
| 1.1.2 猪瘟的防控策略 | 第11-12页 |
| 1.2 猪瘟病毒分类和基因组结构 | 第12-15页 |
| 1.2.1 5’非编码区(5’NTR) | 第12页 |
| 1.2.2 核衣壳蛋白C | 第12-13页 |
| 1.2.3 结构蛋白Erns | 第13页 |
| 1.2.4 结构蛋白E | 第13页 |
| 1.2.5 结构蛋白E | 第13页 |
| 1.2.6 P7 | 第13页 |
| 1.2.7 NS2~3蛋白 | 第13-14页 |
| 1.2.8 NS4 | 第14页 |
| 1.2.9 NS5 | 第14-15页 |
| 1.3 猪瘟标记疫苗概述 | 第15-18页 |
| 1.3.1 基因突变疫苗 | 第15-16页 |
| 1.3.2 病毒活载体疫苗 | 第16-17页 |
| 1.3.3 亚单位疫苗 | 第17页 |
| 1.3.4 DNA疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.5 多肽疫苗 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第18-20页 |
| 1.5.1 突变毒株的分子生物学构建 | 第18-19页 |
| 1.5.2 突变毒株的拯救和细胞传代 | 第19页 |
| 1.5.3 MC株在兔体中的传代及免疫抗体检测 | 第19-20页 |
| 第二章 MC和MC-Flag的分子生物学构建 | 第20-33页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 试验材料 | 第20-21页 |
| 2.2.1 引物 | 第20页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第20页 |
| 2.2.3 酶和主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.3 试验方法 | 第21-29页 |
| 2.3.1 WH303最小识别氨基酸序列的突变 | 第21-25页 |
| 2.3.2 突变片段连接至pMD18-T-NOtI-BamHI-flag和pMD18-T-NotI-BamHI | 第25-27页 |
| 2.3.3 突变片段连接至 C 株 | 第27-29页 |
| 2.4 试验结果 | 第29-32页 |
| 2.4.1 297 -582、583-300PCR和重叠PCR结果 | 第29页 |
| 2.4.2 MT-582583阳性质粒酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.4.3 pMD18-T-NOtI-BamHI-flag-582583M和pMD18-T-NotI-BamHI-582583M阳性质粒鉴定 | 第30页 |
| 2.4.4 csfull-flag-582583M和csfull-582583M阳性质粒酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.5 测序后序列比对结果 | 第31-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 病毒的拯救与传代 | 第33-45页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 试验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 细胞培养所需材料和试剂 | 第33页 |
| 3.2.2 电转所需的材料和试剂 | 第33-34页 |
| 3.2.3 仪器和设备 | 第34页 |
| 3.3 PK15细胞的培养 | 第34-35页 |
| 3.3.1 复苏 | 第34页 |
| 3.3.2 传代 | 第34-35页 |
| 3.3.3 冻存 | 第35页 |
| 3.4 病毒的拯救 | 第35-39页 |
| 3.4.1 质粒线性化 | 第35页 |
| 3.4.2 去RNA酶 | 第35-36页 |
| 3.4.3 苯酚氯仿抽提 | 第36页 |
| 3.4.4 酒精沉淀 | 第36页 |
| 3.4.5 重悬 | 第36页 |
| 3.4.6 体外转录 | 第36页 |
| 3.4.7 电转 | 第36-37页 |
| 3.4.8 病毒传代 | 第37页 |
| 3.4.9 免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) | 第37页 |
| 3.4.10 间接免疫荧光染色 | 第37-38页 |
| 3.4.11 RT-PCR验证 | 第38-39页 |
| 3.5 试验结果 | 第39-44页 |
| 3.5.1 全长质粒线性化 | 第39页 |
| 3.5.2 体外转录 | 第39-40页 |
| 3.5.3 病毒的拯救与细胞传代 | 第40-43页 |
| 3.5.4 RT-PCR和测序结果 | 第43-44页 |
| 3.6 讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 MC株在兔体中的传代及免疫抗体检测 | 第45-56页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 试验材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1 主要试剂和材料 | 第45页 |
| 4.2.2 实验动物 | 第45页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第45-46页 |
| 4.3 试验方法 | 第46-49页 |
| 4.3.1 实验动物的准备 | 第46页 |
| 4.3.2 实验动物接种 | 第46页 |
| 4.3.3 实验动物体温的观测与分析 | 第46页 |
| 4.3.4 组织的采取与固定 | 第46页 |
| 4.3.5 兔脾组织RT-PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.6 组织切片的制备 | 第47页 |
| 4.3.7 组织切片免疫组化 | 第47-48页 |
| 4.3.8 兔血清猪瘟抗体检测 | 第48-49页 |
| 4.4 试验结果 | 第49-55页 |
| 4.4.1 兔体热反应结果 | 第49-50页 |
| 4.4.2 兔脾毒的RT-PCR鉴定 | 第50-51页 |
| 4.4.3 组织切片免疫组化结果 | 第51-54页 |
| 4.4.4 兔血清抗体测定结果 | 第54-55页 |
| 4.5 讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 结论与创新点 | 第56-57页 |
| 5.1 结论 | 第56页 |
| 5.2 创新点 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68页 |
