| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 基因打靶技术 | 第10-11页 |
| 1.2 锌指核酸酶(ZFN) | 第11-12页 |
| 1.3 转录激活因子类似效应因子核酸酶（TALEN） | 第12-13页 |
| 1.4 常间回文重复序列丛集关联蛋白系统（CRISPR/CAS） | 第13-16页 |
| 1.5 检测基因打靶效率的方法 | 第16-17页 |
| 1.6 KCNQ1OT1及MEG3基因简介 | 第17-18页 |
| 1.7 293T细胞与小鼠ES细胞简介 | 第18页 |
| 1.8 脂质体转染与电转染简介 | 第18-19页 |
| 1.9 研究的主要内容及意义 | 第19-20页 |
| 2 实验材料和方法 | 第20-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 实验细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 实验用质粒载体 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.5 实验用引物 | 第22-23页 |
| 2.1.6 实验试剂的配制 | 第23-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-42页 |
| 2.2.1 打靶载体的提取 | 第25-27页 |
| 2.2.2 mgRNA的构建 | 第27-31页 |
| 2.2.3 打靶载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.4 打靶细胞的制备 | 第33-38页 |
| 2.2.5 打靶细胞的检测 | 第38-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| 3.1 打靶载体的构建结果 | 第42-48页 |
| 3.1.1 mgRNA的构建结果 | 第42-44页 |
| 3.1.2 ES细胞打靶载体的构建结果 | 第44-48页 |
| 3.2 细胞实验结果 | 第48-53页 |
| 3.3 细胞鉴定结果 | 第53-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 GRNA的构建方法 | 第56页 |
| 4.2 双链断裂工具CRISPR/CAS9系统 | 第56-57页 |
| 4.3 CRISPR/CAS9打靶效率检测方法 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |