| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 miR-544a通过下调CDH1、上调Vimentin促进肺癌细胞的侵袭和转移 | 第13-66页 |
| 1.前言 | 第13-18页 |
| 1.1 肿瘤概述 | 第13页 |
| 1.2 肺癌概述 | 第13-14页 |
| 1.3 miRNAs 概述 | 第14页 |
| 1.4 miRNAs 与肿瘤 | 第14-15页 |
| 1.5 EMT 与肿瘤 | 第15-18页 |
| 2.材料和方法 | 第18-40页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.2 细胞培养 | 第20-21页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第20页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第20-21页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第21页 |
| 2.3 miRNA表达谱系检测 | 第21-26页 |
| 2.3.1 实验准备 | 第21页 |
| 2.3.2 细胞总 RNA 提取 | 第21-22页 |
| 2.3.3 miRNAs 芯片检测 | 第22-23页 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR验证miR544a表达情况 | 第23-26页 |
| 2.4 细胞转染 | 第26-27页 |
| 2.5 细胞转染效果监测 | 第27-32页 |
| 2.5.1 QPCR | 第27页 |
| 2.5.2 Transwell 侵袭实验 | 第27-28页 |
| 2.5.3 划痕实验 | 第28-29页 |
| 2.5.4 Western Blot分析 | 第29-32页 |
| 2.6 miR-544a 靶基因预测及验证 | 第32-40页 |
| 2.6.1 生物信息学方法预测 | 第32-33页 |
| 2.6.2 荧光素酶报告基因分析 | 第33-40页 |
| 3.结果 | 第40-55页 |
| 3.1 95D 和 95C 总 RNA 的提取和质量鉴定 | 第40页 |
| 3.2 cDNA 检测 | 第40-41页 |
| 3.3 miRNAs 芯片检测分析 | 第41-44页 |
| 3.3.1 miRNAs 芯片信号图 | 第41-43页 |
| 3.3.2 miRNAs 在 95D 和 95C 中的差异表达 | 第43-44页 |
| 3.4 QPCR 验证 miR-544a 在 95D 和 95C 中的表达情况 | 第44-45页 |
| 3.5 QPCR 检测细胞转染效果 | 第45-46页 |
| 3.6 miR-544a 对细胞侵袭能力的影响 | 第46-49页 |
| 3.6.1 Transwell 侵袭实验 | 第46-48页 |
| 3.6.2 划痕实验 | 第48-49页 |
| 3.7 生物信息学预测 miR-544a 的靶基因 | 第49-50页 |
| 3.8 双荧光素酶报告系统活性检测 | 第50-52页 |
| 3.9 转染细胞中 CDH1 和 Vimentin 表达情况 | 第52-55页 |
| 3.9.1 CDH1 在转染细胞中的表达 | 第52页 |
| 3.9.2 Vimentin 在转染细胞中的表达 | 第52-55页 |
| 4.讨论 | 第55-59页 |
| 5.结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 第二章 miR-544a通过下调GSK-3β使肺癌细胞获得肿瘤干细胞的特征 | 第66-93页 |
| 1.前言 | 第66-70页 |
| 1.1 肿瘤干细胞 | 第66页 |
| 1.2 miRNAs 与肿瘤干细胞 | 第66-67页 |
| 1.3 CD133 与肿瘤干细胞 | 第67页 |
| 1.4 Wnt/β-catenin 信号通路与肿瘤 | 第67-70页 |
| 2.材料和方法 | 第70-77页 |
| 2.1 材料 | 第70-71页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第70页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第70-71页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第71页 |
| 2.2 miR-544a 靶基因预测及验证 | 第71-73页 |
| 2.2.1 生物信息学方法预测 | 第71-72页 |
| 2.2.2 荧光素酶报告基因分析 | 第72-73页 |
| 2.3 构建稳定表达 miR-544a 的 95C 和 95D 细胞株 | 第73-75页 |
| 2.3.1 构建 miR-544a 的表达质粒 | 第73-74页 |
| 2.3.2 构建稳定表达miR-544a的95C和95D细胞株 | 第74-75页 |
| 2.4 QPCR 鉴定检测 miR-544a 稳定表达株 | 第75页 |
| 2.4.1 总 RNA 的提取 | 第75页 |
| 2.4.2 逆转录合成 cDNA | 第75页 |
| 2.4.3 QPCR 检测 | 第75页 |
| 2.5 Western Blot 检测 GSK-3β、β-catenin、CD133 的表达 | 第75页 |
| 2.6 肿瘤球悬浮培养 | 第75-76页 |
| 2.6.1 实验原理 | 第75-76页 |
| 2.6.2 培养基配制 | 第76页 |
| 2.6.3 肿瘤球悬浮培养 | 第76页 |
| 2.6.4 肿瘤球的传代 | 第76页 |
| 2.7 统计学处理 | 第76-77页 |
| 3.结果 | 第77-84页 |
| 3.1 生物信息学预测 miR-544a 的靶基因 | 第77页 |
| 3.2 荧光素酶报告系统验证 miR-544a 的靶基因 | 第77-79页 |
| 3.3 QPCR 验证 miR-544a 稳定表达株 | 第79-80页 |
| 3.4 Western Blot 检测 GSK-3β、β-catenin、CD133 的表达 | 第80-82页 |
| 3.4.1 GSK-3β在转染细胞中的表达 | 第81页 |
| 3.4.2 β-catenin 在转染细胞中的表达 | 第81页 |
| 3.4.3 CD133 在转染细胞中的表达 | 第81-82页 |
| 3.5 肿瘤球悬浮培养 | 第82-84页 |
| 4.讨论 | 第84-86页 |
| 5.结论 | 第86-87页 |
| 创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 综述 | 第93-110页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 缩略词表 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第112-113页 |
