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猪脂肪沉积关键基因筛选及TCTP基因功能研究

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-16页
文献综述第16-39页
 第一章 脂肪沉积及其调控研究进展第16-27页
   ·脂肪沉积的分子基础第16-17页
     ·多潜能干细胞第16页
     ·脂肪祖细胞第16页
     ·前体脂肪细胞第16页
     ·成熟脂肪细胞第16-17页
   ·脂肪组织的发育第17页
   ·脂肪组织的功能第17-19页
     ·贮存热能和保持体温第17-18页
     ·保护自身组织功能第18页
     ·脂肪组织的内分泌功能第18页
     ·脂肪组织的调节免疫作用第18-19页
   ·脂肪沉积过程中关键调控因子第19-25页
     ·PPARγ第19-20页
     ·C/EBPs第20页
     ·ADD1/SREBP-1c第20-21页
     ·Wnt/β-catenin第21-22页
     ·细胞周期蛋白第22-23页
     ·KLFs第23-24页
     ·最新发现的一些与脂肪沉积有关的因子第24-25页
   ·猪脂肪沉积规律第25-27页
 第二章 功能基因筛选克隆技术研究进展第27-35页
   ·第一代DNA 测序技术第27-30页
     ·化学降解法第27-28页
     ·双脱氧链终止法第28页
     ·荧光自动测序技术第28-29页
     ·杂交测序技术第29-30页
   ·第二代测序技术第30-32页
     ·454 测序技术第30-31页
     ·Solexa 测序技术第31页
     ·SOLiD 测序技术第31-32页
   ·第三代DNA 测序技术第32-33页
     ·HeliScope 测序技术第32-33页
     ·新型纳米孔测序技术第33页
   ·测序技术在猪脂肪组织基因表达谱的应用第33-35页
 第三章 翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)研究进展第35-39页
   ·翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的发现第35页
   ·TCTP 基因及mRNA 的结构第35-36页
   ·TCTP 蛋白的特征与结构第36页
   ·TCTP 的生物学特性及功能第36-39页
     ·组胺释放因子功能第36页
     ·微管结合功能第36-37页
     ·钙离子结合功能第37页
     ·抗凋亡作用第37页
     ·其它功能第37-39页
实验研究第39-115页
 第四章 猪脂肪组织基因表达谱文库的构建与高通量测序第39-48页
  前言第39-40页
   ·实验材料与方法第40-43页
     ·实验动物及样品采集第40-41页
     ·实验仪器与设备第41页
     ·实验试剂第41页
     ·实验方法第41-43页
   ·结果第43-47页
     ·猪脂肪组织总RNA 质量检测第43-44页
     ·猪脂肪组织cDNA 文库的质量检测第44页
     ·猪脂肪组织基因表达谱高通量测序数据第44-45页
     ·猪脂肪组织高通量测序序列分布规律第45-47页
   ·讨论第47-48页
 第五章 猪脂肪组织不同文库差异基因筛选及注释第48-64页
  前言第48页
   ·材料与方法第48-49页
     ·Tags 比对分析第48页
     ·差异基因筛选与注释第48-49页
     ·反义转录本分析第49页
     ·新转录本分析第49页
   ·结果第49-62页
     ·Tag 比对分析第49-51页
     ·差异基因筛选第51-56页
     ·不同品种和不同发育阶段猪脂肪组织中脂肪沉积相关基因的表达第56-59页
     ·反义链转录分析第59-61页
     ·脂肪沉积中新转录本第61-62页
   ·讨论第62-64页
 第六章 猪脂肪组织基因表达谱高级数据挖掘第64-91页
  前言第64页
   ·材料与方法第64-65页
     ·GO 功能显著性富集分析第64-65页
     ·Pathway 显著性富集分析第65页
   ·结果第65-88页
     ·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因所处的细胞位置富集第65-67页
     ·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因参与的分子功能富集第67-68页
     ·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因参与的分子过程富集第68-69页
     ·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因通路分析(pathway)第69-70页
     ·不同品种猪间差异基因在脂肪沉积相关的pathway 分析第70-75页
     ·不同发育阶段猪间差异基因在脂肪沉积相关的pathway 分析第75-81页
     ·不同品种猪间差异基因在与疾病相关的pathway 分析第81-84页
     ·不同发育阶段猪间差异基因在与疾病相关的pathway 分析第84-88页
   ·讨论第88-91页
 第七章 基因表达谱数据可靠性验证第91-96页
  前言第91页
   ·材料与方法第91-93页
     ·测序饱和度分析第91页
     ·实验重复性分析第91页
     ·RT-qPCR 测定验证第91-93页
   ·结果第93-95页
     ·测序饱和度分析第93-94页
     ·实验重复性分析第94页
     ·RT-qPCR 验证第94-95页
   ·讨论第95-96页
 第八章 猪翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)生物信息学分析第96-101页
  前言第96页
   ·材料与方法第96页
   ·结果第96-100页
     ·猪TCTP 同源基因的核苷酸序列及氨基酸序列同源性分析第96-97页
     ·猪TCTP 蛋白的氨基酸序列进化性分析第97-98页
     ·猪TCTP 蛋白的二级结构及跨膜结构预测分析第98-99页
     ·相关转录因子结合位点的预测第99页
     ·GO 注释分析第99-100页
   ·讨论第100-101页
 第九章 猪TCTP 在各组织和脂肪细胞中的表达谱分析第101-108页
  前言第101页
   ·材料与方法第101-104页
     ·材料第101页
     ·脂肪细胞培养第101页
     ·总RNA 提取第101页
     ·高通量测序第101-102页
     ·实时定量PCR(RT-qPCR)检测第102页
     ·ELISA 测定蛋白第102-103页
     ·数据处理第103-104页
   ·结果第104-106页
     ·TCTP 在猪不同发育阶段脂肪组织中的表达差异第104页
     ·TCTP 在不同品种猪脂肪组织的表达差异第104-105页
     ·TCTP 在猪不同组织中表达规律第105-106页
     ·TCTP 在脂肪细胞增殖分化过程中的时序表达第106页
   ·讨论第106-108页
 第十章 TCTP 基因沉默对猪脂肪细胞增殖分化的影响第108-115页
  前言第108页
   ·材料与方法第108-111页
     ·实验动物第108页
     ·主要试剂第108页
     ·脂肪细胞培养第108页
     ·总RNA 提取第108页
     ·合成与筛选siRNA第108-109页
     ·实时定量PCR(RT-qPCR)检测第109页
     ·细胞的总蛋白提取第109-110页
     ·Western blotting第110页
     ·油红 O 染色第110-111页
     ·数据处理第111页
   ·结果第111-114页
     ·siRNA 转染猪前体脂肪细胞浓度筛选第111-112页
     ·沉默条件的筛选第112页
     ·沉默效果的检测第112页
     ·TCTP-siRNA 对猪前体脂肪细胞分化的影响第112-113页
     ·TCTP-siRNA 对PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c 和 LPL 基因 mRNA 表达的影响第113页
     ·TCTP-siRNA 对PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c 和 LPL 蛋白表达的影响第113-114页
   ·讨论第114-115页
结论第115-117页
创新点第117-118页
进一步的研究内容第118-119页
参考文献第119-126页
附录第126-127页
致谢第127-128页
作者简介第128页

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