摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-16页 |
文献综述 | 第16-39页 |
第一章 脂肪沉积及其调控研究进展 | 第16-27页 |
·脂肪沉积的分子基础 | 第16-17页 |
·多潜能干细胞 | 第16页 |
·脂肪祖细胞 | 第16页 |
·前体脂肪细胞 | 第16页 |
·成熟脂肪细胞 | 第16-17页 |
·脂肪组织的发育 | 第17页 |
·脂肪组织的功能 | 第17-19页 |
·贮存热能和保持体温 | 第17-18页 |
·保护自身组织功能 | 第18页 |
·脂肪组织的内分泌功能 | 第18页 |
·脂肪组织的调节免疫作用 | 第18-19页 |
·脂肪沉积过程中关键调控因子 | 第19-25页 |
·PPARγ | 第19-20页 |
·C/EBPs | 第20页 |
·ADD1/SREBP-1c | 第20-21页 |
·Wnt/β-catenin | 第21-22页 |
·细胞周期蛋白 | 第22-23页 |
·KLFs | 第23-24页 |
·最新发现的一些与脂肪沉积有关的因子 | 第24-25页 |
·猪脂肪沉积规律 | 第25-27页 |
第二章 功能基因筛选克隆技术研究进展 | 第27-35页 |
·第一代DNA 测序技术 | 第27-30页 |
·化学降解法 | 第27-28页 |
·双脱氧链终止法 | 第28页 |
·荧光自动测序技术 | 第28-29页 |
·杂交测序技术 | 第29-30页 |
·第二代测序技术 | 第30-32页 |
·454 测序技术 | 第30-31页 |
·Solexa 测序技术 | 第31页 |
·SOLiD 测序技术 | 第31-32页 |
·第三代DNA 测序技术 | 第32-33页 |
·HeliScope 测序技术 | 第32-33页 |
·新型纳米孔测序技术 | 第33页 |
·测序技术在猪脂肪组织基因表达谱的应用 | 第33-35页 |
第三章 翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)研究进展 | 第35-39页 |
·翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的发现 | 第35页 |
·TCTP 基因及mRNA 的结构 | 第35-36页 |
·TCTP 蛋白的特征与结构 | 第36页 |
·TCTP 的生物学特性及功能 | 第36-39页 |
·组胺释放因子功能 | 第36页 |
·微管结合功能 | 第36-37页 |
·钙离子结合功能 | 第37页 |
·抗凋亡作用 | 第37页 |
·其它功能 | 第37-39页 |
实验研究 | 第39-115页 |
第四章 猪脂肪组织基因表达谱文库的构建与高通量测序 | 第39-48页 |
前言 | 第39-40页 |
·实验材料与方法 | 第40-43页 |
·实验动物及样品采集 | 第40-41页 |
·实验仪器与设备 | 第41页 |
·实验试剂 | 第41页 |
·实验方法 | 第41-43页 |
·结果 | 第43-47页 |
·猪脂肪组织总RNA 质量检测 | 第43-44页 |
·猪脂肪组织cDNA 文库的质量检测 | 第44页 |
·猪脂肪组织基因表达谱高通量测序数据 | 第44-45页 |
·猪脂肪组织高通量测序序列分布规律 | 第45-47页 |
·讨论 | 第47-48页 |
第五章 猪脂肪组织不同文库差异基因筛选及注释 | 第48-64页 |
前言 | 第48页 |
·材料与方法 | 第48-49页 |
·Tags 比对分析 | 第48页 |
·差异基因筛选与注释 | 第48-49页 |
·反义转录本分析 | 第49页 |
·新转录本分析 | 第49页 |
·结果 | 第49-62页 |
·Tag 比对分析 | 第49-51页 |
·差异基因筛选 | 第51-56页 |
·不同品种和不同发育阶段猪脂肪组织中脂肪沉积相关基因的表达 | 第56-59页 |
·反义链转录分析 | 第59-61页 |
·脂肪沉积中新转录本 | 第61-62页 |
·讨论 | 第62-64页 |
第六章 猪脂肪组织基因表达谱高级数据挖掘 | 第64-91页 |
前言 | 第64页 |
·材料与方法 | 第64-65页 |
·GO 功能显著性富集分析 | 第64-65页 |
·Pathway 显著性富集分析 | 第65页 |
·结果 | 第65-88页 |
·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因所处的细胞位置富集 | 第65-67页 |
·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因参与的分子功能富集 | 第67-68页 |
·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因参与的分子过程富集 | 第68-69页 |
·不同品种、不同发育阶段猪脂肪组织差异基因通路分析(pathway) | 第69-70页 |
·不同品种猪间差异基因在脂肪沉积相关的pathway 分析 | 第70-75页 |
·不同发育阶段猪间差异基因在脂肪沉积相关的pathway 分析 | 第75-81页 |
·不同品种猪间差异基因在与疾病相关的pathway 分析 | 第81-84页 |
·不同发育阶段猪间差异基因在与疾病相关的pathway 分析 | 第84-88页 |
·讨论 | 第88-91页 |
第七章 基因表达谱数据可靠性验证 | 第91-96页 |
前言 | 第91页 |
·材料与方法 | 第91-93页 |
·测序饱和度分析 | 第91页 |
·实验重复性分析 | 第91页 |
·RT-qPCR 测定验证 | 第91-93页 |
·结果 | 第93-95页 |
·测序饱和度分析 | 第93-94页 |
·实验重复性分析 | 第94页 |
·RT-qPCR 验证 | 第94-95页 |
·讨论 | 第95-96页 |
第八章 猪翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)生物信息学分析 | 第96-101页 |
前言 | 第96页 |
·材料与方法 | 第96页 |
·结果 | 第96-100页 |
·猪TCTP 同源基因的核苷酸序列及氨基酸序列同源性分析 | 第96-97页 |
·猪TCTP 蛋白的氨基酸序列进化性分析 | 第97-98页 |
·猪TCTP 蛋白的二级结构及跨膜结构预测分析 | 第98-99页 |
·相关转录因子结合位点的预测 | 第99页 |
·GO 注释分析 | 第99-100页 |
·讨论 | 第100-101页 |
第九章 猪TCTP 在各组织和脂肪细胞中的表达谱分析 | 第101-108页 |
前言 | 第101页 |
·材料与方法 | 第101-104页 |
·材料 | 第101页 |
·脂肪细胞培养 | 第101页 |
·总RNA 提取 | 第101页 |
·高通量测序 | 第101-102页 |
·实时定量PCR(RT-qPCR)检测 | 第102页 |
·ELISA 测定蛋白 | 第102-103页 |
·数据处理 | 第103-104页 |
·结果 | 第104-106页 |
·TCTP 在猪不同发育阶段脂肪组织中的表达差异 | 第104页 |
·TCTP 在不同品种猪脂肪组织的表达差异 | 第104-105页 |
·TCTP 在猪不同组织中表达规律 | 第105-106页 |
·TCTP 在脂肪细胞增殖分化过程中的时序表达 | 第106页 |
·讨论 | 第106-108页 |
第十章 TCTP 基因沉默对猪脂肪细胞增殖分化的影响 | 第108-115页 |
前言 | 第108页 |
·材料与方法 | 第108-111页 |
·实验动物 | 第108页 |
·主要试剂 | 第108页 |
·脂肪细胞培养 | 第108页 |
·总RNA 提取 | 第108页 |
·合成与筛选siRNA | 第108-109页 |
·实时定量PCR(RT-qPCR)检测 | 第109页 |
·细胞的总蛋白提取 | 第109-110页 |
·Western blotting | 第110页 |
·油红 O 染色 | 第110-111页 |
·数据处理 | 第111页 |
·结果 | 第111-114页 |
·siRNA 转染猪前体脂肪细胞浓度筛选 | 第111-112页 |
·沉默条件的筛选 | 第112页 |
·沉默效果的检测 | 第112页 |
·TCTP-siRNA 对猪前体脂肪细胞分化的影响 | 第112-113页 |
·TCTP-siRNA 对PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c 和 LPL 基因 mRNA 表达的影响 | 第113页 |
·TCTP-siRNA 对PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c 和 LPL 蛋白表达的影响 | 第113-114页 |
·讨论 | 第114-115页 |
结论 | 第115-117页 |
创新点 | 第117-118页 |
进一步的研究内容 | 第118-119页 |
参考文献 | 第119-126页 |
附录 | 第126-127页 |
致谢 | 第127-128页 |
作者简介 | 第128页 |