| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 超长链多不饱和脂肪酸(VLCPUFAs)研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 植物基因工程合成VLCPUFAs | 第15-16页 |
| 1.3 二酰甘油酰基转移酶DGAT | 第16-21页 |
| 1.3.1 DGAT功能 | 第18页 |
| 1.3.2 DGAT类型 | 第18-21页 |
| 1.4 本研究目的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 马铃薯致病疫霉及其生长条件 | 第22页 |
| 2.1.2 拟南芥及其生长条件 | 第22页 |
| 2.1.3 酵母及其生长条件 | 第22页 |
| 2.1.4 菌株 | 第22页 |
| 2.1.5 载体 | 第22页 |
| 2.1.6 引物 | 第22-23页 |
| 2.1.7 药品及试剂 | 第23-27页 |
| 2.1.7.1 酶和生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.7.2 抗生素 | 第23-24页 |
| 2.1.7.3 培养基 | 第24-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 小量提取植物基因组方法(SDS法) | 第27-28页 |
| 2.2.2 总RNA提取方法(TriZol) | 第28页 |
| 2.2.3 RNA甲醛变性胶电泳检测 | 第28-29页 |
| 2.2.4 分光光度计法检测 | 第29页 |
| 2.2.5 DNase Ⅰ(RNase free)消化Total RNA中的DNA | 第29-30页 |
| 2.2.6 cDNA第一链的合成(TRANS试剂盒) | 第30页 |
| 2.2.7 Real-time Quantitative PCR(UltraSYBR Mixture) | 第30-31页 |
| 2.2.8 普通PCR扩增 | 第31页 |
| 2.2.9 重组反应 | 第31页 |
| 2.2.9.1 PCR产物连接到T/A克隆载体(以pMD18-T simple vector为例) | 第31页 |
| 2.2.9.2 T4连接 | 第31页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| 2.2.10.1 大肠杆菌感受态细胞的制备(XL10) | 第31-32页 |
| 2.2.10.2 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.2.11 根癌农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| 2.2.11.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.2.11.2 根癌农杆菌感受态细胞的转化(冻融法) | 第32-33页 |
| 2.2.12 质粒DNA的提取(Biomiga试剂盒法) | 第33页 |
| 2.2.13 质粒DNA的酶切实验(双酶切) | 第33-34页 |
| 2.2.14 DNA片段的回收 | 第34页 |
| 2.2.15 表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.16 酿酒酵母的转化及诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.2.16.1 酿酒酵母的转化 | 第35页 |
| 2.2.16.2 酿酒酵母的诱导表达 | 第35页 |
| 2.2.16.3 酵母脂肪酸的提取及分析 | 第35-36页 |
| 2.2.17 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第36-37页 |
| 2.2.17.1 拟南芥的育苗 | 第36页 |
| 2.2.17.2 拟南芥的遗传转化 | 第36-37页 |
| 2.2.17.3 转基因拟南芥植株的筛选 | 第37页 |
| 2.2.18 烟草的瞬时表达 | 第37页 |
| 2.2.19 甘油三酯(TAG)的测定 | 第37-38页 |
| 2.3 生物信息学分析网站和软件 | 第38-42页 |
| 2.3.1 生物信息学分析网站 | 第38-39页 |
| 2.3.2 生物信息学分析软件 | 第39-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-61页 |
| 3.1 二酰甘油酰基转移酶DGAT的生物信息学分析 | 第42-51页 |
| 3.1.1 真核生物中DGAT基因的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.2 真核生物DGAT基因的进化 | 第43-44页 |
| 3.1.3 DGAT的基因结构和跨膜结构分析 | 第44-47页 |
| 3.1.4 DGAT基因在拟南芥、大豆、水稻、番茄、玉米中表达分析 | 第47-51页 |
| 3.2 Phytophthorainfestans中DGAT基因的功能鉴定 | 第51-61页 |
| 3.2.1 Phytophthora infestans中DGAT基因的分离及系统进化树分析 | 第51-52页 |
| 3.2.2 Phytophthora infestans中DGAT的基因结构分析 | 第52-53页 |
| 3.2.3 PhytophthorainfestansDGAT在酵母中的功能鉴定 | 第53-57页 |
| 3.2.3.1 PhytophthorainfestansDGAT基因的克隆及载体构建 | 第53页 |
| 3.2.3.2 酵母突变体互补实验验证DGAT活性 | 第53-54页 |
| 3.2.3.3 转基因酵母生长曲线的测定 | 第54-55页 |
| 3.2.3.4 转基因酵母TAG含量的测定 | 第55-57页 |
| 3.2.4 PhytophthorainfestansDGAT在拟南芥中的功能鉴定 | 第57-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 DGAT的进化 | 第61页 |
| 4.2 DGAT1/2的底物专一性 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第80页 |
