| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 核内复制的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 核内复制 | 第14-15页 |
| 1.1.2 核内复制与胁迫 | 第15-16页 |
| 1.2 干旱胁迫的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 干旱胁迫 | 第16页 |
| 1.2.2 干旱胁迫对植物的影响 | 第16-18页 |
| 1.3 TOP6B基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 拓扑异构酶Ⅵ | 第18页 |
| 1.3.2 TOP6B对核内复制和胁迫的影响 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 棉花GaTOP6B基因的分子克隆与鉴定 | 第20-37页 |
| 2.1 植物材料与培养条件 | 第20-21页 |
| 2.1.2 实验载体 | 第20页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.1.4 试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 引物及测序 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 亚洲棉RNA的提取及反转录 | 第21-23页 |
| 2.2.2 克隆GaTOP6B基因 | 第23页 |
| 2.2.3 基于ⅥGS系统的pTRV2-GaTOP6B和过表达的pCAMBIA1300-GaTOP6B载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.4 GaTOP6B基因的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.2.5 GaTOP6B不同组织表达分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 GaTOP6B在17%PEG6000胁迫下表达分析 | 第28页 |
| 2.2.7 GaTOP6B的亚细胞定位 | 第28-29页 |
| 2.3 结果分析 | 第29-35页 |
| 2.3.1 GaTOP6B的克隆 | 第29-30页 |
| 2.3.2 基于ⅥGS系统的pTRV2-GaTOP6B和过表达pCAMBIA1300-GaTOP6B载体的构建 | 第30页 |
| 2.3.3 GaTOP6B的生物信息学分析 | 第30-33页 |
| 2.3.4 GaTOP6B基因的不同组织表达分析 | 第33-34页 |
| 2.3.5 PEG6000胁迫下GaTOP6B的表达分析 | 第34页 |
| 2.3.6 GaTOP6B蛋白的亚细胞定位 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 3 沉默GaTOP6B基因对棉花细胞倍性及耐旱性的影响 | 第37-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 供试植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 实验质粒及菌株 | 第37页 |
| 3.1.3 常用试剂 | 第37页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第37-38页 |
| 3.2 沉默GaTOP6B的亚洲棉细胞倍性分析 | 第38-40页 |
| 3.2.1 亚洲棉ⅥGS体系的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.2 转化植株的GaTOP6B基因的表达水平检测 | 第39页 |
| 3.2.3 株高统计 | 第39页 |
| 3.2.4 沉默GaTOP6B棉花的细胞倍性分析 | 第39页 |
| 3.2.5 沉默GaTOP6B棉花的细胞学分析 | 第39-40页 |
| 3.3 沉默GaTOP6B的亚洲棉耐旱性研究 | 第40-44页 |
| 3.3.1 亚洲棉植株的干旱处理 | 第40页 |
| 3.3.2 棉花叶片中抗氧化酶含量测定及表达水平检测 | 第40-42页 |
| 3.3.3 脯氨酸含量测定 | 第42页 |
| 3.3.4 丙二醛含量测定 | 第42-43页 |
| 3.3.5 DAB法检测H_2O_2的含量 | 第43页 |
| 3.3.6 叶绿素含量的测定 | 第43-44页 |
| 3.3.7 气孔观察 | 第44页 |
| 3.3.8 棉花叶片中失水率和相对含水量的测定 | 第44页 |
| 3.3.9 胁迫相关基因的表达分析 | 第44页 |
| 3.4 结果分析 | 第44-53页 |
| 3.4.1 目的基因的表达水平检测 | 第44-45页 |
| 3.4.2 株高的检测 | 第45-46页 |
| 3.4.3 沉默GaTOP6B的棉花细胞倍性分析 | 第46页 |
| 3.4.4 沉默GaTOP6B棉花的细胞学分析 | 第46-47页 |
| 3.4.5 相关基因的检测 | 第47页 |
| 3.4.6 干旱胁迫对沉默GaTOP6B的亚洲棉植株的表型影响 | 第47-48页 |
| 3.4.7 干旱胁迫对沉默GaTOP6B的棉花叶片叶绿素含量的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.8 干旱胁迫对沉默GaTOP6B棉花的抗氧化酶活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.9 DAB法检测干旱胁迫后棉花叶片的H_2O_2含量 | 第50页 |
| 3.4.10 干旱胁迫对沉默GaTOP6B的棉花脯氨酸和丙二醛含量的影响 | 第50-51页 |
| 3.4.11 沉默GaTOP6B对棉花气孔的影响 | 第51-52页 |
| 3.4.12 沉默GaTOP6B对棉花叶片的失水率的影响 | 第52页 |
| 3.4.13 干旱胁迫对沉默GaTOP6B的棉花中胁迫相关基因表达量的影响 | 第52-53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-55页 |
| 4.超表达GaTOP6B基因对拟南芥细胞倍性及耐旱性的影响 | 第55-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 4.1.2 实验质粒 | 第55页 |
| 4.1.3 主要溶液及抗生素配制 | 第55页 |
| 4.2 超表达GaTOP6B转基因拟南芥植株的创制 | 第55-56页 |
| 4.3 超表达GaTOP6B转基因拟南芥细胞倍性分析 | 第56-57页 |
| 4.3.1 超表达转基因拟南芥相关基因表达水平检测 | 第56页 |
| 4.3.2 超表达GaTOP6B转基因拟南芥倍性分析 | 第56页 |
| 4.3.3 超表达GaTOP6B转基因拟南芥细胞学分析 | 第56-57页 |
| 4.4 超表达GaTOP6B转基因拟南芥耐旱性分析 | 第57页 |
| 4.4.1 发芽率及根长统计 | 第57页 |
| 4.4.2 转基因拟南芥叶片失水率分析及叶片相对含水量测定。 | 第57页 |
| 4.4.3 脯氨酸含量测定 | 第57页 |
| 4.5 结果分析 | 第57-63页 |
| 4.5.1 超表达GaTOP6B转基因拟南芥的验证 | 第57-58页 |
| 4.5.2 超表达GaTOP6B的转基因拟南芥表型差异 | 第58页 |
| 4.5.3 倍性分析 | 第58-59页 |
| 4.5.4 细胞学分析 | 第59-60页 |
| 4.5.5 GaTOP6B相关基因的表达水平分析 | 第60页 |
| 4.5.6 不同浓度甘露醇胁迫下发芽率及根长统计 | 第60-61页 |
| 4.5.7 干旱胁迫对转基因拟南芥叶片含水量和失水率及脯氨酸含量的影响 | 第61-62页 |
| 4.5.8 干旱胁迫对转基因拟南芥气孔的影响 | 第62-63页 |
| 4.6 讨论 | 第63-65页 |
| 5 超表达GaTOP6B基因的转基因拟南芥转录组数据分析 | 第65-72页 |
| 5.1 供试植物材料 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 预处理 | 第65页 |
| 5.2.2 转录组测序及分析 | 第65页 |
| 5.2.3 差异表达基因的注释及分析 | 第65-66页 |
| 5.3 结果分析 | 第66-70页 |
| 5.3.1 转基因拟南芥差异表达基因COG功能分类 | 第66-67页 |
| 5.3.2 干旱胁迫下差异表达基因的GO、COG和KEGG分析 | 第67-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-72页 |
| 6 结论与展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 附录 本实验中所用引物 | 第82-83页 |
| 个人简历 | 第83页 |
| 硕士期间发表论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
