| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 中英文缩略词 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 材料和方法 | 第17-42页 |
| 1 材料 | 第17-22页 |
| 1.1 载体 | 第17-18页 |
| 1.2 细胞系 | 第18页 |
| 1.3 主要试剂和仪器 | 第18-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-42页 |
| 2.1 CHO-S细胞CMAH位点Crispr/Cas9系统载体的构建 | 第22-28页 |
| 2.2 转染HEK293T细胞筛选高效率的切割载体pGL3-U6-CMAH-sgRNA | 第28-29页 |
| 2.3 流式分选并获取单克隆细胞 | 第29-30页 |
| 2.4 CMAH基因定点突变细胞的鉴定 | 第30-33页 |
| 2.5 GGTA1基因的CRISPR/Cas9系统载体的构建 | 第33-37页 |
| 2.6 转染HEK293T细胞筛选高效率的切割载体pGL3-U6-GGTA1-sgRNA | 第37页 |
| 2.7 流式分选并获取单克隆细胞 | 第37-38页 |
| 2.8 鉴定GGTA1基因是否发生突变 | 第38-39页 |
| 2.9 细胞功能学实验 | 第39-41页 |
| 2.10 统计学处理 | 第41-42页 |
| 结果 | 第42-55页 |
| 1 CMAH基因突变的CHO-S细胞构建成功 | 第42-48页 |
| 1.1 pGL3-U6-CMAH-sgRNA载体的酶切鉴定结果 | 第42页 |
| 1.2 pmCherry-EGFP-CMAH-Reporter载体的酶切结果 | 第42-43页 |
| 1.3 筛选出高效的pGL3-U6-CMAH-sgRNA切割载体 | 第43-45页 |
| 1.4 pGL3-U6-CMAH-sgRNA1、pmCherry-EGFP-CMAH-Reporter和Cas9共转染目的细胞CHO-S细胞的荧光结果 | 第45-46页 |
| 1.5 CMAH基因突变的CHO-S细胞基因组DNA的PCR产物结果 | 第46-47页 |
| 1.6 CMAH基因突变的CHO-S细胞基因组RNA的Q-PCR结果 | 第47-48页 |
| 2 在CMAH基因突变的CHO-S细胞基础上GGTA1基因突变的CHO-S细胞构建成功 | 第48-54页 |
| 2.1 pGL3-U6-GGTA1-sgRNA载体的酶切鉴定结果 | 第48页 |
| 2.2 pmCherry-EGFP-GGTA1-Reporter载体的酶切结果 | 第48-49页 |
| 2.3 筛选出高效的pGL3-U6-GGTA1-sgRNA切割载体 | 第49-51页 |
| 2.4 pGL3-U6-GGTA1-sgRNA1、pmCherry-EGFP-GGTA1-Reporter和Cas9共转染CMAH基因突变的CHO-S细胞的荧光结果图 | 第51-52页 |
| 2.5 GGTA1基因突变的CHO-S细胞基因组DNA的PCR产物结果 | 第52-53页 |
| 2.6 GGTA1基因突变的CHO-S细胞基因组RNA的Q-PCR产物结果 | 第53-54页 |
| 3 细胞功能实验结果 | 第54-55页 |
| 3.1 细胞增殖实验结果 | 第54页 |
| 3.2 突变株细胞表达外源蛋白的能力 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 综述 | 第65-89页 |
| 参考文献(综述) | 第80-89页 |
| 个人简历 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
