| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 油橄榄简述 | 第12-13页 |
| 2 油橄榄分子生物学研究进展 | 第13-16页 |
| 2.1 分子标记在油橄榄研究中的应用 | 第13页 |
| 2.2 油橄榄转录组学研究 | 第13-15页 |
| 2.2.1 油橄榄育种繁殖及果实脱落机制转录组研究 | 第13-14页 |
| 2.2.2 逆境胁迫下油橄榄转录组研究 | 第14-15页 |
| 2.2.3 油橄榄代谢途径转录组研究 | 第15页 |
| 2.3 油橄榄次生代谢途径酶基因克隆研究 | 第15-16页 |
| 3 植物萜类物质合成研究进展 | 第16-21页 |
| 3.1 植物帖类物质的生物学意义 | 第16页 |
| 3.2 植物帖类物质的合成代谢途径 | 第16-19页 |
| 3.3 植物HMGR基因研究概况 | 第19-21页 |
| 3.3.1 HMGR在萜类合成途径中的生物学意义 | 第19页 |
| 3.3.2 植物中HMGR基因的克隆研究 | 第19-20页 |
| 3.3.3 HMGR结构及其催化机制 | 第20-21页 |
| 4 实时荧光定量PCR | 第21-24页 |
| 4.1 荧光定量PCR概述 | 第21页 |
| 4.2 荧光定量PCR的分类 | 第21-22页 |
| 4.3 影响荧光定量PCR的因素 | 第22-23页 |
| 4.4 荧光定量PCR内参基因的选择 | 第23页 |
| 4.5 荧光定量PCR在植物中的应用 | 第23-24页 |
| 5 研究目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 油橄榄HMGR基因家族的克隆及分析 | 第26-46页 |
| 1 实验材料、试剂和仪器 | 第26-27页 |
| 1.1 实验材料 | 第26页 |
| 1.2 试剂 | 第26页 |
| 1.3 仪器 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.1 总RNA的提取及检测 | 第27-28页 |
| 2.2 cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| 2.3 油橄榄HMGR基因家族的克隆 | 第28-29页 |
| 2.3.1 基因克隆PCR引物设计 | 第28-29页 |
| 2.3.2 HMGR基因家族的克隆与测序 | 第29页 |
| 2.4 油橄榄HMGR基因的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-44页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第30页 |
| 3.2 OeHMGR基因的克隆及测序 | 第30-35页 |
| 3.3 OeHMGR基因编码蛋白序列相似性分析 | 第35-39页 |
| 3.4 OeHMGR基因编码蛋白的理化性质分析 | 第39-40页 |
| 3.5 OeHMGR基因编码蛋白二级结构和三级结构预测 | 第40-41页 |
| 3.6 OeHMGR基因编码蛋白信号肽与跨膜区预测分析 | 第41-42页 |
| 3.7 OeHMGR基因编码蛋白的系统进化树分析 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 HMGR基因的克隆 | 第44页 |
| 4.2 HMGR基因的生物信息学 | 第44-46页 |
| 第三章 油橄榄HMGR基因家族的原核表达及功能验证 | 第46-59页 |
| 1 实验材料、试剂和仪器 | 第46-47页 |
| 1.1 实验材料 | 第46页 |
| 1.2 试剂 | 第46页 |
| 1.3 仪器 | 第46-47页 |
| 2 实验方法 | 第47-52页 |
| 2.1 原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 2.2 诱导表达 | 第48-49页 |
| 2.3 表达蛋白SDS-PAGE检测 | 第49-50页 |
| 2.4 表达蛋白分离纯化 | 第50页 |
| 2.5 蛋白质含量检测 | 第50-51页 |
| 2.5.1 蛋白标准曲线的绘制 | 第50页 |
| 2.5.2 蛋白含量的测定 | 第50-51页 |
| 2.6 重组OeHMGR酶活测定 | 第51-52页 |
| 2.6.1 体外酶催化反应 | 第51页 |
| 2.6.2 GC-MS测定产物结构 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 3.1 表达载体的构建 | 第52页 |
| 3.2 诱导表达 | 第52-55页 |
| 3.3 蛋白质含量及酶活测定 | 第55-57页 |
| 3.3.1 蛋白质含量测定 | 第55-56页 |
| 3.3.2 蛋白酶功能验证 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 4.1 表达宿主菌及载体的选择 | 第57页 |
| 4.2 重组质粒pET30b(+)-OeHMGR的构建 | 第57-58页 |
| 4.3 原核诱导表达及表达蛋白功能验证 | 第58-59页 |
| 第四章 HMGR基因家族在油橄榄中的表达分析 | 第59-64页 |
| 1 实验材料、试剂与仪器 | 第59-60页 |
| 1.1 实验材料 | 第59页 |
| 1.2 试剂 | 第59页 |
| 1.3 仪器 | 第59-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-61页 |
| 2.1 RNA的提取 | 第60页 |
| 2.2 cDNA第一链的合成 | 第60页 |
| 2.3 OeHMGR基因荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 2.4 目的基因mRNA相对表达量测定 | 第61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-63页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第61-62页 |
| 3.2 HMGR基因家族在油橄榄不同组织中的表达分析 | 第62页 |
| 3.3 HMGR基因家族在油橄榄果实不同发育期的表达分析 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 1 研究结果 | 第64页 |
| 2 创新点 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第75页 |
