| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 健康养殖 | 第14-15页 |
| 1.1.1 健康养殖的概念 | 第14页 |
| 1.1.2 健康养殖的意义 | 第14-15页 |
| 1.2 奶牛乳腺炎 | 第15-17页 |
| 1.2.1 乳腺炎的病因 | 第15页 |
| 1.2.2 乳腺炎的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.3 乳腺炎的危害 | 第16-17页 |
| 1.3 奶牛乳腺炎的防治 | 第17页 |
| 1.3.1 抗生素防治 | 第17页 |
| 1.3.2 非抗生素预防 | 第17页 |
| 1.4 引起乳腺炎的病原菌 | 第17-20页 |
| 1.4.1 金黄色葡萄球菌 | 第18页 |
| 1.4.2 金黄色葡萄球菌的致病机理 | 第18-19页 |
| 1.4.3 甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌 | 第19页 |
| 1.4.4 甲氧西林抗性 | 第19-20页 |
| 1.5 金黄色葡萄球菌中的调节因子 | 第20-21页 |
| 1.5.1 Sar家族中的SarS和SarV | 第20页 |
| 1.5.2 双组份信号转导系统 | 第20-21页 |
| 1.6 抗生素 | 第21-22页 |
| 1.6.1 抗生素的分类 | 第21-22页 |
| 1.6.2 抗生素的作用机制 | 第22页 |
| 1.7 抗生素在实际畜牧生产应用过程中出现的问题 | 第22-23页 |
| 1.8 本研究的目的意义和研究内容 | 第23-25页 |
| 1.8.1 研究的目的意义 | 第23页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 qRT-PCR验证转录组结果 | 第25-31页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 培养基和试剂配制 | 第25页 |
| 2.1.3 基因克隆及转化用溶液 | 第25页 |
| 2.1.4 琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第25页 |
| 2.1.5 仪器与设备 | 第25页 |
| 2.1.6 引物及序列 | 第25-26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.2 cDNA合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3 qRT-PCR验证 | 第27-28页 |
| 2.3 试验结果 | 第28-29页 |
| 2.3.1 转录组结果 | 第28页 |
| 2.3.2 qRT-PCR结果 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 第三章 构建目的基因的敲除株和过表达菌株 | 第31-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 菌株 | 第31页 |
| 3.1.2 培养基和试剂的配制 | 第31页 |
| 3.1.3 基因克隆及转化用溶液 | 第31页 |
| 3.1.4 琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第31页 |
| 3.1.5 仪器与设备 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 试验菌株DNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.2 基因的克隆 | 第31-32页 |
| 3.2.3 敲除载体的构建 | 第32-34页 |
| 3.2.4 构建BA01611-ΔvraR的过表达菌株 | 第34-36页 |
| 3.3 试验结果 | 第36-38页 |
| 3.3.1 敲除sarS基因的电泳结果 | 第36页 |
| 3.3.2 敲除sarV基因的电泳结果 | 第36-37页 |
| 3.3.3 敲除vraR基因的电泳结果 | 第37页 |
| 3.3.4 重组质粒电转至BA01611-ΔvraR的电泳结果 | 第37-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 敲除菌的表型变化 | 第40-46页 |
| 4.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 药品与试剂 | 第40页 |
| 4.1.2 基因克隆及转化用溶液 | 第40-41页 |
| 4.1.3 琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第41页 |
| 4.1.4 仪器与设备 | 第41页 |
| 4.2 试验方法 | 第41-42页 |
| 4.2.1 菌株耐药性的测定 | 第41页 |
| 4.2.2 菌株生物膜形成能力的测定 | 第41-42页 |
| 4.2.3 菌株溶血能力的测定 | 第42页 |
| 4.2.4 菌株产生血浆凝固酶能力的测定 | 第42页 |
| 4.3 试验结果 | 第42-44页 |
| 4.3.1 敲除菌耐药性的变化 | 第42-43页 |
| 4.3.2 敲除菌生物膜形成能力的变化 | 第43页 |
| 4.3.3 敲除菌溶血能力的变化 | 第43-44页 |
| 4.3.4 敲除菌产生血浆凝固酶能力的变化 | 第44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 4.5 小结 | 第45-46页 |
| 第五章 探究vraR调控的下游基因 | 第46-52页 |
| 5.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 5.1.1 药品与试剂 | 第46页 |
| 5.1.2 基因克隆及转化用溶液 | 第46页 |
| 5.1.3 琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第46页 |
| 5.1.4 仪器与设备 | 第46页 |
| 5.1.5 引物及序列 | 第46-47页 |
| 5.2 试验方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 样品的制备 | 第47页 |
| 5.2.2 RNA的提取 | 第47页 |
| 5.2.3 cDNA合成 | 第47-48页 |
| 5.2.4 实时定量PCR | 第48页 |
| 5.3 试验结果 | 第48-50页 |
| 5.3.1 甲氧西林抗性基因mecA的相对表达量 | 第48-49页 |
| 5.3.2 基因vraR调控的下游基因的相对表达量 | 第49-50页 |
| 5.4 讨论 | 第50-51页 |
| 5.5 小结 | 第51-52页 |
| 第六章 论文总结 | 第52-53页 |
| 6.1 研究结论 | 第52页 |
| 6.2 创新点 | 第52页 |
| 6.3 下一步研究思路 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-65页 |
| 缩略词 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
