| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1 根结线虫的防治进展 | 第12-14页 |
| 1.1 根结线虫的危害 | 第12页 |
| 1.2 根结线虫的防治 | 第12-14页 |
| 2 苏云金芽胞杆菌杀线虫机制的研究 | 第14-19页 |
| 2.1 苏云金芽胞杆菌的生物学特征、分布及产生的活性物质 | 第14-15页 |
| 2.2 苏云金芽胞杆菌杀线虫的研究进展 | 第15-19页 |
| 3 秀丽小杆线虫简介 | 第19页 |
| 4 蛋白质组学的应用与发展 | 第19-20页 |
| 5 立题目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-42页 |
| 1 材料 | 第22-31页 |
| 1.1 供试菌株 | 第22页 |
| 1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 1.3 抗生素浓度 | 第23页 |
| 1.4 PCR引物合成 | 第23-24页 |
| 1.5 主要试剂盒和试剂 | 第24-25页 |
| 1.5.1 主要试剂盒 | 第24页 |
| 1.5.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 1.6 主要仪器 | 第25-26页 |
| 1.7 相关溶液的配制 | 第26-31页 |
| 1.7.1 Cry6Aa2对根结线虫的孵化率、半致死率、运动和感染实验的试剂配制 | 第26-28页 |
| 1.7.2 双向电泳实验及质谱相关溶液 | 第28-30页 |
| 1.7.3 秀丽小杆线虫RNA提取及荧光定量PCR(qRT-PCR)试剂的配制 | 第30页 |
| 1.7.4 Cry6Aa2对秀丽小杆线虫突变体LC_(50)测定试剂的配制 | 第30-31页 |
| 2 实验路线 | 第31页 |
| 3 实验方法 | 第31-42页 |
| 3.1 Cry6Aa2对根结线虫的孵化率、半致死率、运动和感染实验 | 第31-33页 |
| 3.1.1 Cry6Aa2晶体蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 3.1.2 蛋白含量的测定 | 第32页 |
| 3.1.3 Cry6Aa2对根结线虫孵化率影响的实验 | 第32页 |
| 3.1.4 根结线虫二龄幼虫的获得 | 第32-33页 |
| 3.1.5 Cry6Aa2对根结线虫半致死率实验 | 第33页 |
| 3.1.6 Cry6Aa2对根结线虫运动恢复能力的影响 | 第33页 |
| 3.1.7 Cry6Aa2对根结线虫感染实验的影响 | 第33页 |
| 3.2 双向电泳秀丽小杆线虫蛋白样品的制备 | 第33-35页 |
| 3.2.1 Cry6Aa2的IPTG诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.2.2 秀丽小杆线虫四龄幼虫的获得 | 第34页 |
| 3.2.3 秀丽小杆线虫蛋白的提取及样品蛋白的SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| 3.3 双向电泳 | 第35-39页 |
| 3.3.1 等点聚焦 | 第35-36页 |
| 3.3.2 IPG胶条的平衡 | 第36页 |
| 3.3.3 第二向SDS-PAGE | 第36-37页 |
| 3.3.4 银染 | 第37-38页 |
| 3.3.5 凝胶图像扫描 | 第38页 |
| 3.3.6 双向电泳图谱分析 | 第38页 |
| 3.3.7 质谱样品准备及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.8 生物信息学软件分析 | 第39页 |
| 3.4 秀丽小杆线虫RNA提取和qRT-PCR | 第39-41页 |
| 3.4.1 秀丽小杆线虫的获取 | 第39-40页 |
| 3.4.2 秀丽小杆线虫RNA提取 | 第40页 |
| 3.4.3 秀丽小杆线虫RNA检测 | 第40页 |
| 3.4.4 qRT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.5 Cry6Aa2晶体蛋白对秀丽小杆线虫突变体的毒力测定 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-56页 |
| 1 Cry6Aa2对根结线虫的作用 | 第42-45页 |
| 1.1 Cry6Aa2晶体蛋白的提取及纯化 | 第42-43页 |
| 1.2 Cry6Aa2对根结线虫虫卵孵化率的抑制 | 第43页 |
| 1.3 Cry6Aa2对二龄根结线虫的毒力作用 | 第43-44页 |
| 1.4 Cry6Aa2对二龄根结线虫运动的抑制 | 第44页 |
| 1.5 Cry6Aa2对二龄根结线虫感染效率的抑制 | 第44-45页 |
| 2 秀丽小杆线虫蛋白组的双向电泳分析和质谱鉴定 | 第45-50页 |
| 2.1 Cry6Aa2在BL21中的诱导表达 | 第45-46页 |
| 2.2 SDS-PAGE检测秀丽小杆线虫蛋白质组 | 第46-47页 |
| 2.3 双向结果图包括差异点分析 | 第47-50页 |
| 3 差异蛋白质谱鉴定结果及差异蛋白的功能分析 | 第50-52页 |
| 3.1 差异蛋白质谱鉴定结果 | 第50页 |
| 3.2 差异蛋白的功能分析 | 第50-52页 |
| 4 利用qRT-PCR技术,检测差异蛋白点在转录水平上的差异 | 第52-54页 |
| 4.1 秀丽小杆线虫总RNA提取检测 | 第52页 |
| 4.2 利用qRT-PCR检测处理和对照组秀丽小杆线虫蛋白质组中10种差异蛋白及3种相关蛋白在转录水平上差异 | 第52-54页 |
| 5 对秀丽小杆线虫突变体活力测定的结果 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-62页 |
| 1 Cry6Aa2对南方根结线虫(M.incognita)的作用 | 第56页 |
| 2 对Cry6Aa2毒素在对秀丽小杆线虫的作用机理及秀丽小杆线虫防御毒素蛋白机制的初步探讨 | 第56-62页 |
| 2.1 热休克蛋白 | 第57-58页 |
| 2.2 能量代谢酶 | 第58-60页 |
| 2.3 DIM-1蛋白 | 第60页 |
| 2.4 与线虫寿命相关的蛋白 | 第60-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文专利 | 第72-73页 |
| 课题受资助的基金项目 | 第73-74页 |
