| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 肌肉生成概述 | 第11-12页 |
| 1.1.1 骨骼肌的发生和发育 | 第11-12页 |
| 1.2 MicroRNA的概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 MicroRNA的形成过程 | 第12-13页 |
| 1.2.2 MicroRNA的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.3 与骨骼肌发育相关的microRNA | 第14-15页 |
| 1.3 miR-133的研究进展 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 分析软件 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要试剂的配置 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-21页 |
| 2.2.1 分离原代牛骨骼肌卫星细胞 | 第20-21页 |
| 2.2.2 牛骨骼肌卫星细胞的培养、复苏 | 第21页 |
| 2.3 牛骨骼肌卫星细胞增殖阶段检测的miR-133b表达量 | 第21-32页 |
| 2.3.1 miR-133b真核过表达载体的构建与细胞转染 | 第23-27页 |
| 2.3.2 Real-time RCR检测miR-133b的表达变化 | 第27-28页 |
| 2.3.3 过表达miR-133b后对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第28页 |
| 2.3.4 miR-133b靶基因的预测 | 第28-29页 |
| 2.3.5 荧光素酶活性验证miR-133b的靶基因SP1 | 第29页 |
| 2.3.6 过表达miR-133b后SP1在mRNA水平上的表达变化 | 第29页 |
| 2.3.7 过表达miR-133b后SP1在蛋白水平上的表达变化 | 第29-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-43页 |
| 3.1 牛骨骼肌卫星细胞的鉴定和培养 | 第32页 |
| 3.2 牛骨骼肌卫星细胞增殖阶段miR-133b表达量检测 | 第32-33页 |
| 3.3 牛miR-133b基因前体与侧翼序列的PCR扩增与测序 | 第33-35页 |
| 3.4 pcDNA3.1(+)-miR-133b真核过表达载体的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5 转染pcDNA3.1(+)-miR133b真核表达载体 | 第36页 |
| 3.6 EdU检测转染miR-133b后对细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
| 3.7 miR-133b的靶基因SP1,双荧光素酶报告载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.8 荧光定量PCR检测转染pcDNA3.1(+)-miR133b后miR-133b的表达变化 | 第38-39页 |
| 3.9 双荧光报告载体检测miR-133b的靶基因SP1 | 第39-40页 |
| 3.10 实时定量PCR检测miR-133b的靶基因SP1 | 第40-41页 |
| 3.11 Wester Blot检测miR-133b的靶基因SP1 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 miR-133家族的功能 | 第43页 |
| 4.2 miR-133在各物种之间功能的比较 | 第43-44页 |
| 4.3 SP1基因功能的探讨 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
