| 目录 | 第4-7页 |
| TABLE OF CONTENTS | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 1. 前言 | 第16-24页 |
| 1.1. 异位融合基因AFlq | 第16-19页 |
| 1.1.1. AFlq基因的生物学特性 | 第16页 |
| 1.1.2. AFlq基因的表达调控机制 | 第16-17页 |
| 1.1.3. AFlq的分布 | 第17页 |
| 1.1.4. AFlq与细胞分化 | 第17-18页 |
| 1.1.5. AFlq基因与恶性血液病 | 第18页 |
| 1.1.6. AFlq基因与实体瘤 | 第18-19页 |
| 1.2. T细胞因子7(TCF7) | 第19-24页 |
| 1.2.1. TCF/LEF转录因子蛋白家族 | 第19-20页 |
| 1.2.2. TCF7基因结构与功能 | 第20页 |
| 1.2.3. TCF7的表达 | 第20页 |
| 1.2.4. TCF7参与Wnt信号通路 | 第20-22页 |
| 1.2.5. TCF7参与T细胞的发育和分化 | 第22页 |
| 1.2.6. TCF7在生长发育中的作用 | 第22-23页 |
| 1.2.7. TCF7与癌症 | 第23-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1. 试剂 | 第24-27页 |
| 2.2 仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.1. 细菌培养相关仪器 | 第27页 |
| 2.2.2. 细胞培养相关仪器 | 第27页 |
| 2.2.3. PCR仪器 | 第27页 |
| 2.2.4. 蛋白检测相关仪器 | 第27页 |
| 2.2.5. 离心机 | 第27页 |
| 2.2.6. 试剂配制相关仪器 | 第27页 |
| 2.2.7. 味标仪 | 第27-28页 |
| 2.2.8. 显微镜 | 第28页 |
| 2.2.9. 核黢定量 | 第28页 |
| 2.2.10. 仪器高压消毒 | 第28页 |
| 2.3. 质粒的构建 | 第28-32页 |
| 2.3.1. pcDNA3-AF1q-6myc全长表达质粒的构建 | 第28页 |
| 2.3.2. pcDNA3-AF1q-6myc各截短片段表达质粒的构建 | 第28-30页 |
| 2.3.3. PEGFP-C3-AF1q绿色荧光蛋白质粒的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.4. pcDNA3-AF1q11-20-6MYC蛋白的第11位丝氨酸突变质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.5. 其他相关质粒的来源 | 第32页 |
| 2.4. 细胞培养 | 第32-34页 |
| 2.4.1. 细胞系培养基的制备 | 第32页 |
| 2.4.2. 细胞系的消化及传代 | 第32-33页 |
| 2.4.3. 神经干细胞培养基的制备 | 第33页 |
| 2.4.4. 神经干细胞的分离与培养 | 第33页 |
| 2.4.5. 神经干细胞的传代 | 第33-34页 |
| 2.5. 细胞转染 | 第34-35页 |
| 2.6. 慢病毒的包装、浓缩和感染 | 第35-36页 |
| 2.6.1. 慢病毒的包装 | 第35页 |
| 2.6.2. 慢病毒的浓缩 | 第35页 |
| 2.6.3. 病毒滴度测定 | 第35-36页 |
| 2.6.4. 慢病毒的感染 | 第36页 |
| 2.7 反转录PCR(RT-PCR) | 第36-38页 |
| 2.7.1. 细胞准备 | 第36页 |
| 2.7.2. RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.7.3. cDNA合成 | 第37页 |
| 2.7.4. 普通半定量PCR | 第37-38页 |
| 2.8. siRNA技术敲除AF1q | 第38页 |
| 2.9. 核蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 2.10. 蛋白定量 | 第39页 |
| 2.11. Western Blotting | 第39-40页 |
| 2.12. 神经球Nestin免疫荧光染色 | 第40页 |
| 2.13. 免疫共沉淀实验(Co-Immunoprecipitation,CO-IP) | 第40-41页 |
| 2.14. MTT检测细胞增殖 | 第41-42页 |
| 2.15. EdU检测细胞增殖 | 第42页 |
| 2.16. 数据分析 | 第42-43页 |
| 3. 实验结果 | 第43-57页 |
| 3.1. AFlq蛋白的定位 | 第43页 |
| 3.2. EDU免疫荧光法检测AFlq蛋白的促增殖作用 | 第43-46页 |
| 3.2.1. AFlq促进HEK293细胞系的增殖 | 第43-44页 |
| 3.2.2. AFlq促进SH-SY5Y细胞系的增殖 | 第44-46页 |
| 3.3. 利用小干扰RNA(siRNA)技术下调AFlq的表达 | 第46页 |
| 3.4. MTT法检测AFlq蛋白的促增殖作用 | 第46-48页 |
| 3.4.1. MTT实验法检测AFlq蛋白促进HEK293细胞系的增殖 | 第46-47页 |
| 3.4.2. MTT实验法检测高表达及敲除AFlq蛋白后对SY5Y细胞系增殖能力的影响 | 第47-48页 |
| 3.5. AFlq蛋白对神经干细胞增殖程度的影响 | 第48-50页 |
| 3.5.1. 神经干细胞的Nestin鉴定 | 第48页 |
| 3.5.2. 慢病毒lenti-AFlq感染神经干细胞使其高表达AFlq | 第48-49页 |
| 3.5.3. 直接测量法检测AFlq基因对神经干细胞增殖的影响 | 第49-50页 |
| 3.6. AFlq与TCF7蛋白相互作用及其作用位点 | 第50-57页 |
| 3.6.1. AFlq与TCF7蛋白相互作用 | 第50-51页 |
| 3.6.2. AFlq与TCF7蛋白的作用位点(一) | 第51-52页 |
| 3.6.3. AFlq与TCF7蛋白的作用位点(二) | 第52-53页 |
| 3.6.4. AFlq蛋白与TCF7蛋白的作用位点(三) | 第53-54页 |
| 3.6.5. 磷酸化的AFlq(pAFlq)蛋白与TCF7蛋白结合 | 第54-55页 |
| 3.6.6 11位丝氨酸突变的AFlq蛋白不能与TCF7蛋白结合 | 第55-57页 |
| 4. 讨论与总结 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第70-71页 |
| 外文论文 RCAN1 Increases Aβ Generation by Promoting N-glycosylation via oligosaccharyltransferase | 第71-94页 |
