| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 插图和附表清单 | 第11-13页 |
| 縮略语表 | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第15-27页 |
| 1.1 奶牛乳房炎的分类 | 第15-16页 |
| 1.1.1 临床型奶牛乳房炎 | 第15-16页 |
| 1.1.2 隐性奶牛乳房炎 | 第16页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎致病机制研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.2.1 金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺的感染 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 金黄色葡萄球菌的毒力因子 | 第18页 |
| 1.2.2.3 金黄色葡萄球菌与宿主的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.3 金黄色葡萄球菌疫苗研究进展 | 第19-25页 |
| 1.3.1 灭活疫苗 | 第19页 |
| 1.3.2 以金黄色葡萄球菌荚膜多糖为靶位的疫苗 | 第19-22页 |
| 1.3.2.1 荚膜多糖研究概况 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2 荚膜多糖的血清型 | 第20-21页 |
| 1.3.2.3 荚膜多糖的生化组成 | 第21页 |
| 1.3.2.4 荚膜多糖疫苗 | 第21-22页 |
| 1.3.3 以金黄色葡萄球菌粘附素为靶位的疫苗 | 第22-25页 |
| 1.3.3.1 粘附素研究概况 | 第22-23页 |
| 1.3.3.2 纤连素结合蛋白 | 第23-24页 |
| 1.3.3.3 凝集因子A | 第24-25页 |
| 1.3.3.4 粘附素疫苗 | 第25页 |
| 1.4 免疫佐剂研究进展 | 第25-27页 |
| 1.4.1 弗氏佐剂 | 第26页 |
| 1.4.2 铝胶盐水佐剂 | 第26页 |
| 1.4.3 脂质体佐剂 | 第26-27页 |
| 1.4.4 大肠杆菌不耐热肠毒素B佐剂 | 第27页 |
| 1.5 金黄色葡萄球菌性乳房炎疫苗对本动物免疫研究概况 | 第27页 |
| 1.6 选题的目的和意义 | 第27页 |
| 2 研究一 金黄色葡萄球菌血清8型CP的提取和纯化 | 第27-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 菌种 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基及主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 试验流程 | 第29页 |
| 2.3 试验方法 | 第29-32页 |
| 2.3.1 S.aureus的活化与培养 | 第29-30页 |
| 2.3.2 S.aureus的处理 | 第30页 |
| 2.3.3 荚膜多糖的提取 | 第30页 |
| 2.3.4 荚膜多糖粗提物含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.3.5 荚膜多糖粗提物的纯化 | 第31-32页 |
| 2.4 试验结果 | 第32-35页 |
| 2.4.1 S.aureus的活化与培养 | 第32页 |
| 2.4.2 荚膜多糖的提取 | 第32页 |
| 2.4.3 荚膜多糖粗提物含量的测定 | 第32-33页 |
| 2.4.4 荚膜多糖粗提物的纯化 | 第33-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-36页 |
| 2.6 小结 | 第36页 |
| 3 研究二 FnBPB-ClfA融合蛋白的诱导表达以及与CP8的偶联 | 第36-44页 |
| 3.1 试验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 菌种 | 第36页 |
| 3.1.2 培养基及主要试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 试验主要仪器 | 第37页 |
| 3.2 试验流程 | 第37-38页 |
| 3.3 试验方法 | 第38-41页 |
| 3.3.1 FnBPB-ClfA融合蛋白的表达 | 第38-39页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| 3.3.3 Ni~+亲和柱的再生 | 第39-40页 |
| 3.3.4 融合蛋白的纯化 | 第40页 |
| 3.3.5 血清8型荚膜多糖的活化衍生 | 第40-41页 |
| 3.3.6 血清8型荚膜多糖与融合蛋白的偶联 | 第41页 |
| 3.4 试验结果 | 第41-43页 |
| 3.4.1 FnBPB-ClfA融合蛋白的表达及纯化 | 第41-42页 |
| 3.4.2 血清8型荚膜多糖与融合蛋白的偶联 | 第42-43页 |
| 3.5 讨论 | 第43页 |
| 3.6 小结 | 第43-44页 |
| 4 研究三 CP8-FnBPB-ClfA配合不同佐剂免疫学特性的研究 | 第44-68页 |
| 4.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 阳性血清 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 4.2 试验流程 | 第45页 |
| 4.3 试验方法 | 第45-51页 |
| 4.3.1 CP8-FnBPB-ClfA的制备 | 第45-46页 |
| 4.3.2 弗氏佐剂与CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制备 | 第46页 |
| 4.3.3 铝胶盐水佐剂与CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制备 | 第46页 |
| 4.3.4 脂质体佐剂与CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制备 | 第46页 |
| 4.3.5 LTB与CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制备 | 第46页 |
| 4.3.6 与CP8-FnBPB-ClfA偶联物配合免疫最佳佐剂的筛选 | 第46-49页 |
| 4.3.6.1 动物的处置 | 第46-47页 |
| 4.3.6.2 兔血清中CP8,FnBPB,ClfA,FnBPB-ClfA和CP8-FnBPB-ClfA抗体的测定 | 第47-48页 |
| 4.3.6.3 兔血清中IgG含量的测定 | 第48页 |
| 4.3.6.4 Western blot鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.6.5 兔血清中总IgG含量及Th1/Th2细胞因子水平测定 | 第49页 |
| 4.3.6.6 T淋巴细胞增殖试验 | 第49页 |
| 4.3.7 最佳免疫部位的筛选 | 第49-50页 |
| 4.3.7.1 动物的分组与处置 | 第49-50页 |
| 4.3.7.2 不同部位免疫动物时血清中总IgG含量及Th1/Th2细胞因子水平测定 | 第50页 |
| 4.3.8 攻毒试验 | 第50-51页 |
| 4.4 试验结果 | 第51-65页 |
| 4.4.1 与CP8-FnBPB-ClfA配合免疫最佳佐剂的筛选 | 第51-63页 |
| 4.4.1.1 兔血清中CP8,FnBPB,ClfA,FnBPB-ClfA和CP8-FnBPB-ClfA抗体的测定 | 第51-55页 |
| 4.4.1.2 兔血清中IgG含量的测定 | 第55-57页 |
| 4.4.1.3 Western blot鉴定 | 第57-58页 |
| 4.4.1.4 兔血清中总IgG含量测定 | 第58-60页 |
| 4.4.1.5 兔血清中Th1/Th2细胞因子水平测定 | 第60-62页 |
| 4.4.1.6 T淋巴细胞增殖试验 | 第62-63页 |
| 4.4.2 最佳免疫部位的筛选 | 第63-65页 |
| 4.4.2.1 不同部位免疫动物时血清中总IgG含量测定 | 第63-64页 |
| 4.4.2.2 不同部位免疫动物时血清中Th1/Th2细胞因子水平测定 | 第64-65页 |
| 4.4.3 攻毒试验 | 第65页 |
| 4.5 讨论 | 第65-67页 |
| 4.6 小结 | 第67-68页 |
| 5 研究四 CP8-FnBPB-ClfA偶联物配合ALUM佐剂对本动物免疫效果的研究 | 第68-85页 |
| 5.1 主要试剂及仪器 | 第68-69页 |
| 5.2 试验流程 | 第69页 |
| 5.3 试验方法 | 第69-71页 |
| 5.3.1 抗原的制备 | 第69页 |
| 5.3.1.1 CP8-FnBPB-ClfA的制备 | 第69页 |
| 5.3.1.2 ALUM佐剂与CP8-FnBPB-ClfA混合疫苗的制备 | 第69页 |
| 5.3.2 动物分组与处置 | 第69-70页 |
| 5.3.3 牛乳中体细胞数测定 | 第70页 |
| 5.3.4 牛乳中细菌的分离鉴定 | 第70页 |
| 5.3.5 牛血清中CP8-FnBPB-ClfA抗体水平测定 | 第70-71页 |
| 5.3.6 奶牛血清中IgG、IgA含量及牛乳中IgG含量测定 | 第71页 |
| 5.3.7 数据分析 | 第71页 |
| 5.4 试验结果 | 第71-83页 |
| 5.4.1 牛乳中体细胞数测定 | 第71-73页 |
| 5.4.2 牛乳中细菌的分离鉴定 | 第73-74页 |
| 5.4.3 牛血清中CP8-FnBPB-ClfA抗体测定 | 第74-76页 |
| 5.4.4 牛血清中IgG及IgA含量测定 | 第76-80页 |
| 5.4.5 牛乳中IgG含量测定 | 第80-83页 |
| 5.5 讨论 | 第83-84页 |
| 5.6 小结 | 第84-85页 |
| 6 总体讨论 | 第85页 |
| 7 结论 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 作者简介 | 第97页 |
