摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
文献综述 | 第13-32页 |
第一章 猪瘟病毒及其NS5A蛋白研究进展 | 第13-23页 |
1.1 猪瘟概述 | 第13页 |
1.2 CSFV基因结构及其编码蛋白的功能 | 第13-18页 |
1.2.1 5’非编码区 | 第14页 |
1.2.2 N~(pro)蛋白 | 第14-15页 |
1.2.3 核衣壳C蛋白 | 第15页 |
1.2.4 E~(rns)蛋白 | 第15-16页 |
1.2.5 E1 蛋白 | 第16页 |
1.2.6 E2 蛋白 | 第16页 |
1.2.7 p7 蛋白 | 第16-17页 |
1.2.8 NS2 蛋白和NS3 蛋白 | 第17页 |
1.2.9 NS4A蛋白和NS4B蛋白 | 第17页 |
1.2.10 NS5B蛋白 | 第17页 |
1.2.11 3’非编码区 | 第17-18页 |
1.3 NS5A研究进展 | 第18-23页 |
1.3.1 猪瘟病毒NS5A蛋白结构特征 | 第18-19页 |
1.3.2 CSFV NS5A蛋白功能研究进展 | 第19-20页 |
1.3.3 CSFV NS5A蛋白对宿主细胞的影响 | 第20-23页 |
第二章 HSP70 及细胞未折叠蛋白反应研究进展 | 第23-32页 |
2.1 热激蛋白 70(HSP70)研究进展 | 第23-27页 |
2.1.1 HSP70 蛋白和其他分子陪伴的细胞功能 | 第23-24页 |
2.1.2 RNA病毒感染上调热激蛋白HSP70 的表达 | 第24-25页 |
2.1.3 HSP70 在病毒复制中的作用 | 第25-27页 |
2.1.4 HSP70 在抗病毒方面的作用 | 第27页 |
2.2 细胞未折叠蛋白反应研究进展 | 第27-32页 |
2.2.1 内质网应激和未折叠蛋白反应 | 第27-29页 |
2.2.2 未折叠蛋白反应介导的对内质网应激的适应机制 | 第29-30页 |
2.2.3 内质网应激诱导细胞凋亡 | 第30-32页 |
试验研究 | 第32-80页 |
第三章 猪瘟病毒NS5A蛋白与HSP70 的相互作用 | 第32-45页 |
3.1 材料与方法 | 第32-37页 |
3.1.1 材料 | 第32-33页 |
3.1.2 方法 | 第33-37页 |
3.2 结果 | 第37-42页 |
3.2.1 真核表达载体的构建及鉴定结果 | 第37-38页 |
3.2.2 带Flag或Myc标签重组质粒在细胞中的表达鉴定结果 | 第38-39页 |
3.2.3 GST-HSP70 融合蛋白的原核诱导表达鉴定结果 | 第39页 |
3.2.4 Co-IP验证NS5A与HSP70 的相互作用 | 第39-40页 |
3.4.5 NS5A蛋白的N段负责与HSP70 的相互结合 | 第40-41页 |
3.4.6 GST-Pulldown验证NS5A与HSP70 的相互作用 | 第41-42页 |
3.4.7 激光共聚焦研究NS5A与HSP70 在细胞中的共定位 | 第42页 |
3.3 讨论 | 第42-44页 |
3.4 小结 | 第44-45页 |
第四章 HSP70 对猪瘟病毒增殖的影响 | 第45-57页 |
4.1 材料与方法 | 第45-48页 |
4.1.1 材料 | 第45-46页 |
4.1.2 方法 | 第46-48页 |
4.2 结果 | 第48-54页 |
4.2.1 构建HSP70 基因过表达及shRNA干扰慢病毒载体 | 第48-49页 |
4.2.2 包装过表达及干扰HSP70 的慢病毒鉴定 | 第49-50页 |
4.2.3 细胞中过表达HSP70 对CSFV增殖的影响 | 第50-52页 |
4.2.4 shRNA介导敲除HSP70 对CSFV增殖的影响 | 第52-53页 |
4.2.5 HSP70 特异性抑制剂槲皮素对CSFV增殖的影响 | 第53-54页 |
4.2.6 CSFV增殖对细胞HSP70 表达的影响 | 第54页 |
4.3 讨论 | 第54-56页 |
4.4 小结 | 第56-57页 |
第五章 猪瘟病毒引起宿主细胞未折叠蛋白反应研究 | 第57-66页 |
5.1 材料与方法 | 第57-60页 |
5.1.1 材料 | 第57-58页 |
5.1.2 方法 | 第58-60页 |
5.2 结果 | 第60-63页 |
5.2.1 检测CSFV感染ST宿主细胞的效果 | 第60页 |
5.2.2 RT-PCR检测CSFV引起XBP1 基因的剪切效应 | 第60-61页 |
5.2.3 qRT-PCR检测CSFV感染细胞中UPR各因子表达水平 | 第61-62页 |
5.2.4 Western blot检测CSFV感染细胞UPR各因子蛋白表达水平变化 | 第62-63页 |
5.3 讨论 | 第63-65页 |
5.4 小结 | 第65-66页 |
第六章 猪瘟病毒NS5A蛋白引起宿主细胞未折叠蛋白反应研究 | 第66-80页 |
6.1 材料与方法 | 第66-70页 |
6.1.1 材料 | 第66-67页 |
6.1.2 方法 | 第67-70页 |
6.2 结果 | 第70-77页 |
6.2.1 外源表达NS5A慢病毒载体的鉴定 | 第70-71页 |
6.2.2 外源表达NS5A慢病毒的鉴定 | 第71-72页 |
6.2.3 定点突变NS5A各载体的鉴定 | 第72-74页 |
6.2.4 RT-PCR方法检测外源表达NS5A蛋白引起XBP1 基因的剪切效应 | 第74-75页 |
6.2.5 基因水平检测外源表达NS5A对细胞UPR各因子影响 | 第75页 |
6.2.6 蛋白水平检测外源表达NS5A对细胞UPR各因子影响 | 第75-76页 |
6.2.7 NS5A各突变体对细胞UPR的影响 | 第76-77页 |
6.3 讨论 | 第77-79页 |
6.4 小结 | 第79-80页 |
结论 | 第80页 |
本论文的创新点 | 第80-81页 |
参考文献 | 第81-95页 |
主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index) | 第95-97页 |
致谢 | 第97-99页 |
作者简介 | 第99页 |