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猪瘟病毒NS5A蛋白与HSP70的相互作用及引起细胞未折叠蛋白反应

摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
文献综述第13-32页
    第一章 猪瘟病毒及其NS5A蛋白研究进展第13-23页
        1.1 猪瘟概述第13页
        1.2 CSFV基因结构及其编码蛋白的功能第13-18页
            1.2.1 5’非编码区第14页
            1.2.2 N~(pro)蛋白第14-15页
            1.2.3 核衣壳C蛋白第15页
            1.2.4 E~(rns)蛋白第15-16页
            1.2.5 E1 蛋白第16页
            1.2.6 E2 蛋白第16页
            1.2.7 p7 蛋白第16-17页
            1.2.8 NS2 蛋白和NS3 蛋白第17页
            1.2.9 NS4A蛋白和NS4B蛋白第17页
            1.2.10 NS5B蛋白第17页
            1.2.11 3’非编码区第17-18页
        1.3 NS5A研究进展第18-23页
            1.3.1 猪瘟病毒NS5A蛋白结构特征第18-19页
            1.3.2 CSFV NS5A蛋白功能研究进展第19-20页
            1.3.3 CSFV NS5A蛋白对宿主细胞的影响第20-23页
    第二章 HSP70 及细胞未折叠蛋白反应研究进展第23-32页
        2.1 热激蛋白 70(HSP70)研究进展第23-27页
            2.1.1 HSP70 蛋白和其他分子陪伴的细胞功能第23-24页
            2.1.2 RNA病毒感染上调热激蛋白HSP70 的表达第24-25页
            2.1.3 HSP70 在病毒复制中的作用第25-27页
            2.1.4 HSP70 在抗病毒方面的作用第27页
        2.2 细胞未折叠蛋白反应研究进展第27-32页
            2.2.1 内质网应激和未折叠蛋白反应第27-29页
            2.2.2 未折叠蛋白反应介导的对内质网应激的适应机制第29-30页
            2.2.3 内质网应激诱导细胞凋亡第30-32页
试验研究第32-80页
    第三章 猪瘟病毒NS5A蛋白与HSP70 的相互作用第32-45页
        3.1 材料与方法第32-37页
            3.1.1 材料第32-33页
            3.1.2 方法第33-37页
        3.2 结果第37-42页
            3.2.1 真核表达载体的构建及鉴定结果第37-38页
            3.2.2 带Flag或Myc标签重组质粒在细胞中的表达鉴定结果第38-39页
            3.2.3 GST-HSP70 融合蛋白的原核诱导表达鉴定结果第39页
            3.2.4 Co-IP验证NS5A与HSP70 的相互作用第39-40页
            3.4.5 NS5A蛋白的N段负责与HSP70 的相互结合第40-41页
            3.4.6 GST-Pulldown验证NS5A与HSP70 的相互作用第41-42页
            3.4.7 激光共聚焦研究NS5A与HSP70 在细胞中的共定位第42页
        3.3 讨论第42-44页
        3.4 小结第44-45页
    第四章 HSP70 对猪瘟病毒增殖的影响第45-57页
        4.1 材料与方法第45-48页
            4.1.1 材料第45-46页
            4.1.2 方法第46-48页
        4.2 结果第48-54页
            4.2.1 构建HSP70 基因过表达及shRNA干扰慢病毒载体第48-49页
            4.2.2 包装过表达及干扰HSP70 的慢病毒鉴定第49-50页
            4.2.3 细胞中过表达HSP70 对CSFV增殖的影响第50-52页
            4.2.4 shRNA介导敲除HSP70 对CSFV增殖的影响第52-53页
            4.2.5 HSP70 特异性抑制剂槲皮素对CSFV增殖的影响第53-54页
            4.2.6 CSFV增殖对细胞HSP70 表达的影响第54页
        4.3 讨论第54-56页
        4.4 小结第56-57页
    第五章 猪瘟病毒引起宿主细胞未折叠蛋白反应研究第57-66页
        5.1 材料与方法第57-60页
            5.1.1 材料第57-58页
            5.1.2 方法第58-60页
        5.2 结果第60-63页
            5.2.1 检测CSFV感染ST宿主细胞的效果第60页
            5.2.2 RT-PCR检测CSFV引起XBP1 基因的剪切效应第60-61页
            5.2.3 qRT-PCR检测CSFV感染细胞中UPR各因子表达水平第61-62页
            5.2.4 Western blot检测CSFV感染细胞UPR各因子蛋白表达水平变化第62-63页
        5.3 讨论第63-65页
        5.4 小结第65-66页
    第六章 猪瘟病毒NS5A蛋白引起宿主细胞未折叠蛋白反应研究第66-80页
        6.1 材料与方法第66-70页
            6.1.1 材料第66-67页
            6.1.2 方法第67-70页
        6.2 结果第70-77页
            6.2.1 外源表达NS5A慢病毒载体的鉴定第70-71页
            6.2.2 外源表达NS5A慢病毒的鉴定第71-72页
            6.2.3 定点突变NS5A各载体的鉴定第72-74页
            6.2.4 RT-PCR方法检测外源表达NS5A蛋白引起XBP1 基因的剪切效应第74-75页
            6.2.5 基因水平检测外源表达NS5A对细胞UPR各因子影响第75页
            6.2.6 蛋白水平检测外源表达NS5A对细胞UPR各因子影响第75-76页
            6.2.7 NS5A各突变体对细胞UPR的影响第76-77页
        6.3 讨论第77-79页
        6.4 小结第79-80页
结论第80页
本论文的创新点第80-81页
参考文献第81-95页
主要缩略词和中英文对照表(Abbreviation Index)第95-97页
致谢第97-99页
作者简介第99页

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