| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语 | 第17-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-50页 |
| 1 重金属污染研究进展 | 第20-30页 |
| 1.1 重金属污染的现状及其修复方法 | 第20-22页 |
| 1.1.1 重金属污染的现状 | 第20-21页 |
| 1.1.2 重金属污染的修复方法 | 第21-22页 |
| 1.2 植物重金属耐性的生理机理 | 第22-24页 |
| 1.2.1 酶系统保护 | 第22-23页 |
| 1.2.2 细胞区域化 | 第23页 |
| 1.2.3 重金属螯合 | 第23-24页 |
| 1.2.4 限制对重金属的吸收和外排 | 第24页 |
| 1.3 植物重金属耐性的分子机理 | 第24-30页 |
| 1.3.1 汞离子还原酶基因(merA)与甲基汞裂解酶基因(merB) | 第24-25页 |
| 1.3.2 铁离子还原酶基因(FRO) | 第25-26页 |
| 1.3.3 离子转运蛋白基因(ZIP和ITR1) | 第26-27页 |
| 1.3.4 Nramp基因家族 | 第27页 |
| 1.3.5 金属硫蛋白基因(MT) | 第27-28页 |
| 1.3.6 植物络合素合酶基因(PCS) | 第28-30页 |
| 2 植物花器官发育研究进展 | 第30-50页 |
| 2.1 花发育模型的几种假说 | 第30-34页 |
| 2.1.1 ABC模型 | 第30-31页 |
| 2.1.2 ABCD模型 | 第31-32页 |
| 2.1.3 ABCDE模型 | 第32-33页 |
| 2.1.4 四聚体模型 | 第33-34页 |
| 2.2 AP2家族成员及其特征 | 第34-42页 |
| 2.2.1 转录因子的概念 | 第34-35页 |
| 2.2.2 AP2类基因及其编码蛋白的特征 | 第35-36页 |
| 2.2.3 AP2家族成员组成及功能特征 | 第36-42页 |
| 2.3 AP2基因在植物生殖生长中的作用 | 第42-50页 |
| 2.3.1 AP2基因对分生组织分化的作用 | 第43-44页 |
| 2.3.2 AP2基因对花发育的作用 | 第44-46页 |
| 2.3.3 AP2基因对种子发育的作用 | 第46-47页 |
| 2.3.4 microRNAs对AP2基因的调控作用 | 第47-50页 |
| 第二章 荷花NNPCS1基因的克隆与表达分析 | 第50-74页 |
| 第一节 荷花NnPCS1基因的克隆及序列分析 | 第50-66页 |
| 1 材料与方法 | 第51-58页 |
| 1.1 植物材料 | 第51页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第51-52页 |
| 1.2.1 试剂 | 第51页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第51页 |
| 1.2.3 菌株与载体 | 第51-52页 |
| 1.2.4 引物序列 | 第52页 |
| 1.3 实验方法 | 第52-58页 |
| 1.3.1 基因兼并引物设计 | 第52-53页 |
| 1.3.2 RNA提取 | 第53页 |
| 1.3.3 1st-Strand cDNA合成及检测 | 第53-54页 |
| 1.3.4 PCR扩增及电泳 | 第54页 |
| 1.3.5 片段纯化与连接与转化 | 第54-55页 |
| 1.3.6 重组子筛选与测序 | 第55页 |
| 1.3.7 RACE | 第55-57页 |
| 1.3.8 cDNA全长序列的获得 | 第57页 |
| 1.3.9 序列比对、分析与进化树构建 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-64页 |
| 2.1 RNA提取质量与反转录效果检测 | 第58页 |
| 2.2 目的中间片段序列测定 | 第58-59页 |
| 2.3 RACE-PCR结果 | 第59-60页 |
| 2.4 荷花NnPCS1基因全长序列的获得 | 第60-61页 |
| 2.5 氨基酸序列同源性比对 | 第61-64页 |
| 2.6 荷花NnPCS1基因氨基酸序列系统进化树构建 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第二节 荷花NnPCS1基因的表达分析 | 第66-74页 |
| 1 材料与方法 | 第67-69页 |
| 1.1 植物材料 | 第67页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第67页 |
| 1.2.1 试剂 | 第67页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第67页 |
| 1.3 实验方法 | 第67-69页 |
| 1.3.1 RNA提取与cDNA合成 | 第67页 |
| 1.3.2 Real-Time PCR(qRT-PCR)分析 | 第67-68页 |
| 1.3.3 NnPCS1基因的表达分析 | 第68-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-71页 |
| 2.1 NnPCS1在不同器官中的节律性表达 | 第69页 |
| 2.2 不同重金属胁迫下NnPCS1的表达 | 第69-70页 |
| 2.3 镉,锌离子复合处理下NnPCS1的表达 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-74页 |
| 第三章 荷花NNPCS1基因的功能分析 | 第74-90页 |
| 1 材料与方法 | 第75-82页 |
| 1.1 植物材料 | 第75页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第75-76页 |
| 1.2.1 主要生化试剂与培养基配制 | 第75-76页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第76页 |
| 1.2.3 菌株和质粒 | 第76页 |
| 1.3 实验方法 | 第76-82页 |
| 1.3.1 NnPCS1正义表达载体的构建 | 第76-77页 |
| 1.3.2 拟南芥的遗传转化 | 第77-80页 |
| 1.3.3 转基因植株的鉴定 | 第80-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-87页 |
| 2.1 荷花NnPCS1基因正义表达载体的构建 | 第82-84页 |
| 2.2 荷花NnPCS1转基因植株的获得及分子鉴定 | 第84-85页 |
| 2.2.1 转基因株系的获得 | 第84页 |
| 2.2.2 转基因株系的分子鉴定 | 第84-85页 |
| 2.3 转基因植株的抗金属性测定 | 第85-87页 |
| 2.3.1 根长的测定 | 第85-86页 |
| 2.3.2 GSH,NPT和PC含量测定 | 第86-87页 |
| 2.3.3 Cd离子含量测定 | 第87页 |
| 3 讨论 | 第87-90页 |
| 第四章 荷花NNAP2基因的克隆与表达分析 | 第90-112页 |
| 第一节 荷花NnAP2基因的克隆及序列分析 | 第90-105页 |
| 1 材料与方法 | 第91-98页 |
| 1.1 植物材料 | 第91页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第91-92页 |
| 1.2.1 试剂 | 第91页 |
| 1.2.2 仪器设备 | 第91页 |
| 1.2.3 菌株与载体 | 第91页 |
| 1.2.4 引物序列 | 第91-92页 |
| 1.3 实验方法 | 第92-98页 |
| 1.3.1 基因兼并引物设计 | 第92页 |
| 1.3.2 RNA提取 | 第92-93页 |
| 1.3.3 cDNA合成及检测 | 第93-94页 |
| 1.3.4 PCR扩增及电泳 | 第94页 |
| 1.3.5 片段纯化与连接与转化 | 第94-95页 |
| 1.3.6 重组子筛选与测序 | 第95页 |
| 1.3.7 RACE PCR | 第95-97页 |
| 1.3.8 cDNA全长序列的获得 | 第97页 |
| 1.3.9 序列比对、分析与进化树构建 | 第97-98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-103页 |
| 2.1 RNA提取质量与反转录效果检测 | 第98页 |
| 2.2 目的中间片段序列测定 | 第98-99页 |
| 2.3 RACE-PCR及全长序列的获得 | 第99页 |
| 2.4 荷花NnAP2基因全长序列的获得 | 第99-100页 |
| 2.5 氨基酸序列同源性比对 | 第100-102页 |
| 2.6 荷花NnAP2基因氨基酸序列系统进化树构建 | 第102-103页 |
| 3 讨论 | 第103-105页 |
| 第二节 荷花NnAP2基因的表达分析 | 第105-112页 |
| 1 材料与方法 | 第106-108页 |
| 1.1 植物材料 | 第106页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第106页 |
| 1.2.1 试剂 | 第106页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第106页 |
| 1.3 实验方法 | 第106-108页 |
| 1.3.1 RNA提取与cDNA合成 | 第106页 |
| 1.3.2 Real-Time PCR(qRT-PCR)分析 | 第106-107页 |
| 1.3.3 NnAP2基因的表达分析 | 第107-108页 |
| 2 结果与分析 | 第108-110页 |
| 2.1 NnAP2在‘锦霞’不同器官中的表达 | 第108页 |
| 2.2 NnAP2在‘锦霞’不同生育时期花器官不同部位的表达 | 第108-109页 |
| 2.3 NnAP2在荷花不同品种不同部位初开期的表达 | 第109-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| 第五章 荷花NNAP2基因的功能分析 | 第112-126页 |
| 1 材料与方法 | 第113-118页 |
| 1.1 植物材料 | 第113页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第113页 |
| 1.2.1 主要生化试剂与培养基配制 | 第113页 |
| 1.2.2 实验仪器 | 第113页 |
| 1.2.3 菌株和质粒 | 第113页 |
| 1.3 实验方法 | 第113-118页 |
| 1.3.1 NnAP2正义表达载体的构建 | 第113-115页 |
| 1.3.2 拟南芥的遗传转化 | 第115页 |
| 1.3.3 转基因植株的鉴定 | 第115-118页 |
| 2 结果与分析 | 第118-123页 |
| 2.1 荷花NnAP2基因正义表达载体的构建 | 第118-119页 |
| 2.2 荷花NnAP2转基因植株的获得及分子鉴定 | 第119-121页 |
| 2.2.1 转基因株系的获得 | 第119-120页 |
| 2.2.2 转基因株系的分子鉴定 | 第120-121页 |
| 2.3 转基因植株的表型分析 | 第121-123页 |
| 2.3.1 株高的比较与赤霉素氧化相关基因的表达 | 第121-122页 |
| 2.3.2 花期早迟与相关基因的表达分析 | 第122-123页 |
| 3 讨论 | 第123-126页 |
| 参考文献 | 第126-148页 |
| 全文结论 | 第148-150页 |
| 创新点 | 第150-152页 |
| 附录 | 第152-164页 |
| 博士期间成果及科研项目 | 第164-166页 |
| 致谢 | 第166页 |
